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分选CD4 CD8细胞之后死细胞太多了，有什么方法可以保护细胞的活性吗？
丁香实验
我用的MACS分选器，BD的试剂，分选CD4 CD8细胞之后死细胞太多了，上流式细胞仪检测到得细胞数太少。有什么方法可以保护细胞的活性吗？
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11 个回答
dxy_29k93ve4
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分离细胞的时候可以加2% 的FBS,MACS分选的时候可以降到0.5% 给他一点营养，别让他饿着
西柚味的芋圆
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操作过程，及组织处理过程一定要尽量冰上操作，动作轻柔。同事要在buffer中添加血清。离心力不能过大。可以买美天妮配套的buffer 获取细胞的过程要用2%FBS的PBS悬细胞。如果担心细胞状态不好，可以增加FBS的浓度。标记beads和MACS上柱的过
CXCR3
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获取细胞的过程要用2%FBS的PBS悬细胞。如果担心细胞状态不好，可以增加FBS的浓度。标记beads和MACS上柱的过程，用低浓度FBS的EDTA PBS溶液。
咸水鱼rain
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用含有血清的PBS，我们使用的是含有0.5%FBS的PBS，MACS过程要快一点，尽量在冰上操作。
空山流水Hz
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1.尽量减少离心次数和离心速度 2.一直保持4℃低温。离心机调为4℃，其余时间放在冰上 3.吹打混匀尽量轻柔
sk1981521
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细胞分离和消化的酶要选择温和一些的酶，分选采用低压和大喷嘴
dxy_0mxazdaw
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在提取细胞的过程中，要一直使用含有1-2%FBS的PBS或者培养基，我们实验室比较奢侈，一直都用的含有血清的培养基，这样细胞状态会很好。并且，加快实验速度也是十分必要的。
txs900416
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使用0.5%的bsa-pbs做缓冲液可以有效保持细胞活性，另分选最后可用培养基重悬细胞，分选时间不宜过长等
peaceful13
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磁珠分选过程中，细胞死亡比较多，可以查看一下几个方面：细胞制备过程中，尽量不要用含有EDTA的Buffer，然后低温进行操作，等到要上分选柱子的时候，再换成磁珠分选用的Buffer，如果是分选Naive的细胞，制备完成后，可以让细胞在室温静置半小时再进行分选，效果会更好一些；分选过程中尽量低温，上柱子之前过筛网，操作过程中尽量不要产生气泡
颜渊溪桥
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你用什么方法分选的，如果用公司的试剂盒Mojo/stem cell分选后的细胞非常好，如果是组织里用流式分选，只能是分选时下面的培养基适当提高血清含量，分选后的细胞体外培养可以加IL-7提高生存率
Timy最爱柠檬水
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1.保证全程冰上操作，适当减少抗体及磁珠孵育时间； 2.体系中加入0.1-1%FBS，维持细胞代谢能力； 3.减少离心时间，降低离心转速。
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