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先阳选磁珠分选CD4+T细胞后,下一步如何分选CD4+CD25-T细胞?

相关实验:肿瘤干细胞的分离纯化

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丁香实验

最近试着开始培养细胞,首先就是磁珠分选CD4+CD25-T细胞。请问先阳选磁珠分选CD4+T细胞后,下一步如何分选CD4+CD25-T细胞?阳选?阴选?中间需要间隔多长时间,有没有可操作性?还是用抗体封闭CD4+CD25+T细胞?

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10 个回答

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半两月光

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最近刚做了一次,我用的是美天旎的kit,先阴选CD4阳性细胞,再标CD25抗体,阴选出来的就是CD25阴性细胞,纯度还挺高的,一定要用它推荐的柱子,否则纯度不高
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dxy_29k93ve4

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可以先MACS分选完了以后上流式分选
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颜渊溪桥

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Biolegend公司有CD4阴选试剂盒,可以解决你这个问题。另外流式分选在多数情况下都可以很好分选想要的细胞群,但是需要多准备些细胞,分选后会死一些。
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Timy最爱柠檬水

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优先分选CD25+细胞,从阴选细胞中再去分选CD4+细胞
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莹啊免疫啊

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可以流式上机分选,用CD25抗体,流式分选前需要脱磁珠,可以多养两天再脱磁珠,不然细胞损耗太大,一般都跟着磁珠被分离掉了,而且细胞带磁珠的情况下最好不用太用力吹打细胞,会对细胞造成机械损伤。如果后续还需要杀伤之类,就得找好一个合适的培养时长。我一般两天
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txs900416

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只能通过流式分选CD25-或者磁珠解离后分选了,或者通过CD25depletion抗体清除CD25阳性细胞。下次分Treg建议先阴选CD25-细胞再阳选CD4+
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dxy_0mxazdaw

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首先利用Cd4抗体磁珠分选出CD4+细胞,然后再用CD25+的磁珠去分选细胞,把磁柱上的CD25+细胞丢弃,收集未标记的细胞
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西柚味的芋圆

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美天旎公司有human CD4+CD25+ regulatory T cell isolation kit。里面的说明书非常详细,一般是先阴性分选CD4+T细胞,然后再阳性分选CD4+CD25+T细胞,另外的组分就是您所需要的CD4+CD25-T细胞。很多高水平杂志的文章都是用这个样的方法和分选策略,因为做Treg功能分析的时候同样需要用到CD4+CD25-T细胞,因此这个分选方法是有依据可循的。
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CXCR3

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分选出来CD4+T细胞,可以标记流式抗体,利用流式分选仪分选CD25-的细胞。
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peaceful13

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必须先解离CD4+细胞上面的磁珠,然后再用CD25+的磁珠去分选细胞,把分选出来的CD25+细胞丢弃,收集未被标记的细胞
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