磁珠分离时出现堵柱现象怎么办？
丁香实验
我用美天尼公司的CD34磁珠分离人脐血中的造血干细胞，开始做了几次都很顺利。可是是最近连续三次实验我遇到了一个令人头疼的问题，就是过MS柱的时候出现柱子堵住，液体无法流下来的现象。我的操作步骤是这样的：先将MS柱放到磁架上，加入500ulBuffer，在液体流完之前加入细胞悬液，这都还顺利，但是再加入500ul Buffer洗柱时，液体滴下来的速度就越来越慢，加入的500ul Buffer还没有滴完，柱子就好像被堵住了一样，液体滴不下了了，无法完成后面两次洗柱。我只能将残余的Buffer冲出来，再过一个新的MS柱。开始我怀疑是不是Buffer配的时间太长了，于是又重配了Buffer。今天，我又做了一次，可还是出现了堵柱的现象。如果每次都得用两个柱子，那老板要批我了。我以前做磁珠分选时都没有遇到过这种现象，可是最近三次连续出现堵柱，到底会是什么原因呢？不知道有没有其他战友曾遇到过类似问题，有什么解决方法呢？我现在十分困惑，还请大家赐教，不胜感激！
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22 个回答
dxy_29k93ve4
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可能是细胞悬液渣渣比较多所以把柱子堵了，可以试试两层200目滤网过一遍细胞，或者还有那种细胞筛滤一遍细胞悬液
微尘IABI
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做磁珠分选之前一定要细胞计数，细胞量太大容易堵。泡沫太多容易堵。做细胞分选之前还需要进行管子的润洗
莹啊免疫啊
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控制细胞浓度，提前拿滤网滤过一下，如果细胞太多，剩下的细胞等待太久，滤过的细胞也要好好重悬再加入到柱子里
大可S51D
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不仅样品要过滤，buffer也最好用0.45um的滤膜过滤一下
来口芝麻薄脆吗
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柱子使用时间久了会造成堵塞的情况，重复使用会有很多死细胞残留；换新的柱子依然滴不下来的原因又可能是buffer或者实验条件的问题，导致细胞在分选之前已经死了大部分，导致堵塞，可以换buffer 全程保持在冰上操作。
peaceful13
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细胞悬液制备的时候尽量不产生气泡～另外细胞数的计数问题检查看看～是不是细胞浓度调节有问题～再者过柱前一定要过一下滤网
dxy_0mxazdaw
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过柱子之前将细胞过一遍白布，确保单细胞悬液没有结块，柱子先用MACS液润洗3遍，如果这种情况下还是会有堵的现象，建议更换柱子，因为持续找问题会使细胞状态非常不好！
zgx3876
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磁珠堵柱基本是样本的问题，样本聚团的缘故。因此解决方法也就是从样本处理的角度出发。最重要原因的就是样本细胞结块，一般过一下40 um滤网。另外体系去除气泡，比如缓冲液做脱气处理
半两月光
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首先。一定要过200目滤网；其次，可以稀释上样浓度；算一下细胞数，是不是超过MS的容量
小破孩YG6Z
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首先在细胞悬液制备上，一定尽量制备成单细胞悬液，在制备时可以使用一些酶使细胞团块降解（DNA酶、胰酶等），充分混悬细胞，打散团块；在加细胞悬液时，将滴管伸至管底加，不要沿着管壁加，未洗净容易堵；细胞悬液的量也要控制好；一个柱子处理后可重复用几次，可以询问厂家具体处理方法，实在不行，就只能询问厂家换个柱子
parallelgmf
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样本是否是组织块制备的单细胞悬液，如果是的话，一定要用筛网过滤细胞，将一些小的组织块和细胞团过滤掉。另外使用的buffer中是否含有EDTA的成分？EDTA可以帮助防止细胞聚团，一般做磁珠分选的buffer中都会添加EDTA，分选结束再进行buffer置换
CXCR3
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我之前也出现过分离干细胞堵柱子的情况，确保细胞样品是单细胞悬液，在标完beads洗抗体时，我们会将样品多过几遍200目的滤网。在样品上柱子的时候，柱子上放两层200目滤网。细胞数如果比较多，接近MS柱子上限，可以试试换一下LS的柱子。
pppeachya
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细胞悬液用 300 目滤网过滤一次，过柱前重悬细胞时再加大液体体积试试～
二狗Echo
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这种情况很可能是细胞堵柱子了，可以调整下Buffer和细胞悬液的终浓度试试。
dxy_4y8zumb0
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1去除死细胞，因为死细胞容易黏连。 2上样前稀释样品
咸水鱼rain
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在润洗分选的柱子时过两层两百目的滤网试一下
AnnaGQTP
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1.样品的处理，确保细胞为单细胞悬液，无粘连，必要时可过筛网。 2.缓冲液的处理，缓冲液必须脱气。 3.加样时速度要慢避免气泡。
txs900416
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主要需要考虑目的细胞的量和总细胞的量是否符合ms柱的要求，必要时建议换ls柱
dxy_6qpin5x4
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样本确认是单细胞悬液，避免有团块。
dxy_b4qu25j6
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制备的细胞悬液在上样之前可以用30um的尼龙网过滤一下（过滤前先用缓冲液湿化过滤器）
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