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关于 PHA 刺激 PBMC 增殖,用 CCK-8 检测 ,实验孔 OD 值却不稳定是为什么?

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东北的雪狼

用 PHA 刺激 PBMC 增殖,用 CCK-8检测,PHA浓度为10μg/ml、IL-2浓度为 250Iu/ml。用的是 U 型底的 96 孔板。检测时间为 5 天,第三天的时候加一些培养液并再加一遍 IL-2。第五天检测,在显微镜下发现增殖的都差不多,但是实验孔 OD 值却不稳定。大家是否遇到过类似的问题?是怎么解决的呢?求解答。
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3 个回答

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roby_0_0_2000

有帮助
你的PHA-p 5ug/ml就可以了,浓度大了自然会死。死于过度刺激。还要加IL-2,不加会死的。
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右左右右

有帮助
一般CCK-8试剂不用来检测PBMCs,而是比较多的用来检测肿瘤细胞的数目。PBMCs的增殖检测我们用的是CellTiter-Glo® LuminescentCell Viability Assay,这两者的差别应该好查的。
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alaling

有帮助
很多药物都具有两面性,并不一定刺激增殖的药物就在所有浓度的情况下都增殖,到某一浓度可能会产生毒性,导致细胞死亡/凋亡。另外,如果事实情况是如此,相信进一步的验证会有不同的发现。不要盲从别人的实验结果。
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