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细胞增殖检测(MTT法)细胞数问题?

相关实验:细胞增殖检测:MTT 法

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心细北方

MTT用的96孔培养板,同一组的两孔细胞数差别太大,那些原因能引起,应该如何改进?

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3 个回答

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天一湖医者

有帮助

移液时的误差,或者部分边缘蒸发。

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未来9

有帮助

产生差别的原因有多种

1.在加细胞时,细胞沉淀下来,导致两孔细胞数不同。我们通常用磁力转子对细胞缓慢搅拌,时刻保持细胞处于悬浮状态。

2.96孔板在培养箱中,由于湿度不够,而培养箱由于具有一定的温度,使得边缘的孔水分蒸发较快,导致培养基中各种成分浓度变化增大,导致细胞状态不同。对于这种现象,要保证培养箱中的湿度,减少开关培养箱的次数和时间。

对于生长较快的细胞,例如每12小时到24小时就传代一次的细胞,应该起始浓度低一些,我一般是96孔板每孔加10 4个细胞,培养液每孔加200ul。

有些细胞生长较慢,例如72小时才传代一次,或者是原代细胞,起始浓度应高一些,我一般是96孔板每孔加2X10 4个细胞,培养液每孔加200ul。

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bamboopiggy

有帮助

1.铺板是否均匀。2.吸出mtt时,是否把底板的细胞也吸出来了,3加入的dmso是否够量

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