提问
提问
我要登录
|免费注册

多聚赖氨酸包被细胞培养板的具体步骤是什么?

相关实验:细胞增殖检测:MTT 法

user-title

dxy_c6k4iiy3

养的是半贴壁细胞,第一次做实验。

wx-share
分享

3 个回答

user-title

bamboopiggy

有帮助

你可以配置好多聚赖氨酸将其过滤除菌,分装,待用。培养的前一天包被培养板把多聚赖氨酸加到培养板中,静置15分钟,吸出多余的多聚赖氨酸,然后用高压过的双蒸水洗板,培养板放入37度烘箱里过夜就可以用了

user-title

未来9

有帮助

可以参考这篇文章:

https://www.docin.com/p-2647499857.html

user-title

whilt-shirt

有帮助

第一天:

1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min;

2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min;

3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);

4. PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加正常山羊血清,室温封闭30min;

5. 吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜;

第二天:

6. 加荧光二抗: PBST 浸洗爬片3次,每次3min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中20-37℃孵育1h,PBST浸洗切片3次,每次3min;

注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。

7. 复染核:滴加DAPI避光孵育5min,对标本进行染核,PBST 5min×4次洗去多余的DAPI;

8. 用吸水纸吸干爬片上的液体,用含抗荧光淬灭剂的封片液封片,然后在荧光显微镜下观察采集图像。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序