细胞增殖检测：BrdU

5-brdu 的分子量为307.1，将100mg分为三份30.7mg（0.1mmol），溶于1ml三蒸水，分装-20度保存。用的时候再稀释100倍，如在1ml溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量，如100ul，避免反复冻融使其活性降低。

1、BudR贮存液的配制

BudR 5mg（先用0.5ml 1N NaOH溶解）然后加蒸馏水至5ml，即成1000ug/ml的贮存液，因BudR遇光会发生分解，贮存液需置棕色瓶并黑纸封瓶避光冰冻保存。 一般用的是用10μg/ml终浓度。

2、终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。

3、弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。

4、甲醇/醋酸固定10min。

5、经固定的玻片空气干燥，0.3%H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。

6、5％正常兔血清封闭。

7、甲酰胺100℃，5min变性核酸。

8、冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性对照加PBS或血清。

9、按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。

细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4%FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。