BrdU检测法检测B细胞增殖

5-溴-2＇-脱氧尿嘧啶（5-bromo-2＇-deoxyuridine， BrdU）是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。

增殖期的细胞需要大量核苷酸，因此可以吸收加入到培养液中的BrdU，进而固定与BrdU结合的细胞，用相应的抗体（抗-BrdU-POD）与细胞上的BrdUFab段特异性结合后，可以使发光底物显色，应用荧光化学发光分析仪检测发光强度即可判定细胞增殖水平，也可应用荧光素标记抗体，流式细胞术进行检测。

BrdU检测法检测B细胞增殖的基本原理是利用BrdU通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶，增殖期的细胞吸收加入到培养液中的BrdU，进而固定与BrdU结合的细胞。

用相应的抗体（抗-BrdU-POD）与细胞上的BrdUFab段特异性结合后，使发光底物显色，再用荧光化学发光分析仪检测发光强度即可判定细胞增殖水平，也可用荧光素标记抗体，流式细胞术进行检测。

试剂：

4．抗体稀释液、洗涤液和底物等

仪器：

BrdU检测法检测B细胞增殖的基本过程可分为以下几步（应用ELISA方法测定细胞的增殖水平，采用BrdU试剂盒检测）：

1．已接种到96孔板的细胞在相应抗原刺激1～5天后，加入BrdU（10 μl／孔·100 μl培养液），细胞培养箱中共同孵育2～24小时。

2．室温下，2000／min，15分钟离心，除去培养液。

3．加入200 μl／孔FixDenat液，室温，30分钟固定细胞。尽量除尽固定液。

4．加入100μl／孔Anti-BrdU-POD反应液，室温放置90分钟。

5．200～300 μl／孔专用洗净液洗板3次，加入100 μl／孔底物溶液，室温反应5～10分钟。