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3H-TdR 掺入法检测B细胞增殖

相关实验:B细胞增殖的检测

别名:放射性核素标记法

最新修订时间:

简介

3H-TdR掺入法又称放射性核素标记法。淋巴细胞经有丝分裂原激活后,进入细胞周期进行有丝分裂。


当细胞进入S期后,细胞合成DNA明显增加,DNA合成需要大量的核苷酸,在培养液中加入3H标记的DNA合成原料胸腺嘧啶脱氧核苷(H-TdR),则3H-TdR作为合成的DNA原料被摄入细胞,掺入新合成的DNA中。


根据放射性核素掺入细胞的量可以推测淋巴细胞增殖情况。此方法客观、准确、重复性好,但需一定的设备,并且放射性核素对环境有污染,需要特殊处理。

原理

3H-TdR掺入法检测B细胞增殖的基本原理是淋巴细胞经有丝分裂原激活后,进入细胞周期进行有丝分裂。


当细胞进入S期后,细胞合成DNA明显增加,DNA合成需要大量的核苷酸,在培养液中加入3H标记的DNA合成原料胸腺嘧啶脱氧核苷(H-TdR)。


则3H-TdR作为合成的DNA原料被摄入细胞,掺入新合成的DNA中,根据放射性核素掺入细胞的量可以推测淋巴细胞增殖情况。

材料与仪器

试剂:


1.3H-TdR工作液

2.闪烁液


仪器:


1. 细胞收集器
2. β液闪计数仪等


步骤

3H-TdR 掺入法检测B细胞增殖的基本过程可分为以下几步:


1.按1:20的比例将浓度为1mCi/ml的3H-TdR 用无血清培养液稀释,终浓度为50 μCi/ml。


2.在培养细胞中每孔加入20 μl3H-TdR(1 μCi/ml),继续培养4~24小时。


3.用多头细胞收集器将每孔培养物分别收集到 UniFilter 96孔微孔板上,抽气过滤洗涤。


4.微孔板放置50 ℃烘干1小时,封闭板底,每孔加25~50 μl MicroScint-O cocktail。

5.在β液闪计数仪上测定每个样品cpm值。


6.结果测定:将丝裂原刺激组和对照组各自的cpm平均值,代入下列公式计算出刺激指数(SI)。

来源:丁香实验

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