3H-TdR 掺入法检测B细胞增殖

3H-TdR掺入法又称放射性核素标记法。淋巴细胞经有丝分裂原激活后，进入细胞周期进行有丝分裂。

当细胞进入S期后，细胞合成DNA明显增加，DNA合成需要大量的核苷酸，在培养液中加入3H标记的DNA合成原料胸腺嘧啶脱氧核苷（H-TdR），则3H-TdR作为合成的DNA原料被摄入细胞，掺入新合成的DNA中。

根据放射性核素掺入细胞的量可以推测淋巴细胞增殖情况。此方法客观、准确、重复性好，但需一定的设备，并且放射性核素对环境有污染，需要特殊处理。

3H-TdR掺入法检测B细胞增殖的基本原理是淋巴细胞经有丝分裂原激活后，进入细胞周期进行有丝分裂。

当细胞进入S期后，细胞合成DNA明显增加，DNA合成需要大量的核苷酸，在培养液中加入3H标记的DNA合成原料胸腺嘧啶脱氧核苷（H-TdR）。

则3H-TdR作为合成的DNA原料被摄入细胞，掺入新合成的DNA中，根据放射性核素掺入细胞的量可以推测淋巴细胞增殖情况。

试剂：

2.闪烁液

仪器：

3H-TdR 掺入法检测B细胞增殖的基本过程可分为以下几步：

1．按1：20的比例将浓度为1mCi／ml的3H-TdR 用无血清培养液稀释，终浓度为50 μCi／ml。

2．在培养细胞中每孔加入20 μl3H-TdR（1 μCi／ml），继续培养4～24小时。

3．用多头细胞收集器将每孔培养物分别收集到 UniFilter 96孔微孔板上，抽气过滤洗涤。

4．微孔板放置50 ℃烘干1小时，封闭板底，每孔加25～50 μl MicroScint-O cocktail。

5．在β液闪计数仪上测定每个样品cpm值。