细胞增殖检测方法讨论 EdU VS BrdU
丁香实验
常用的 Brdu 法检测细胞增殖
直接测定 DNA 合成是细胞增殖检测的最准确方法之一,是测定物质毒性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法,其中以前常用的方式是利用胸腺嘧啶核苷酸类似物---- BrdU 进行检测。
因为在细胞周期的 S 期,和细胞一起孵育的BrdU能渗入 DNA 分子中,再结合BrdU抗体与渗入 DNA 的 BrdU 特异性结合,就能够检测到 DNA 复制活跃的细胞。
但 BrdU 有一大缺点,就是需要变性 DNA 后才能与抗体结合,但这就破坏了 DNA 双链结构,影响了其他染料的结合染色,导致染色弥散,准确性降低等问题。
哈佛大学医学院细胞生物学家Adrian Salic就认为:「为了能够暴露 BrdU 的抗原表位,必须用高浓度的盐酸,乙酸或酶解,但经历了如此严重的处理后,细胞原本精巧细致的结构在显微镜下就变得惨不忍睹了。」
事实上,现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生---- EdU 检测。Edu 法检测细胞增殖,优势在哪?
Edu 工作原理
EdU 可以检测新合成的 DNA,而 EU 则可以检测新合成的 RNA。
EU 是一种尿嘧啶核苷类似物,能够在 RNA 转录时期代替尿嘧啶( U )渗入正在合成的 RNA 分子,基于 EU 与 Apollo® 荧光染料的特异性反应进行RNA检测。
EU 能够在体内和体外水平检测时间和空间上 RNA 合成的变化,能够更方便地研究 RNA 转录位点,结合相关抗体标记能够检测与 RNA 有相互作用的蛋白。
结合 EdU 和 EU 进行检测新合成的 DNA 和新合成的 RNA,可以深入开展细胞增殖、细胞周期、细胞毒性、DNA 复制及修复、信号通路等方面的研究。