EdU-告别细胞增殖的烦扰

细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。

EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性，广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。

传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法需要DNA变性，抗原修复，抗原抗体过夜孵育，操作步骤复杂繁琐。

并且由于BrdU抗体分子较大，嵌入DNA分子中的BrdU无法直接与BrdU抗体结合，必须先进行DNA变性操作才能使BrdU抗原表位暴露，但变性的程度可能导致错误结果。如果变性不充分，会导致BrdU难以暴露，无法检测，而且变性过程从边缘向中间渗透，会导致细胞核DNA的变性不均匀，边缘模糊不清。如果变性过分，则会导致DNA断裂，甚至降解，导致核染不均一。另外，不同抗体试剂公司的抗体质量不一致，造成难以确保实验重复性，且容易产生假阳性结果。

图1 BrdU需要DNA变性，但变性过分或没有变性都可能容易导致BrdU结果假阳性

与BrdU方法相比，EdU检测方法无需DNA变性，无需抗原修复，无需抗原抗体反应，更简单、更灵敏、更快速、更准确，是细胞增殖检测的最佳选择。

图2 BrdU与EdU检测原理示意图 表1 BrdU与EdU检测优缺点比较

图3 BrdU需要DNA变性后才能与抗体结合，导致BrdU、Hoechst染色弥散，边缘模糊不清；而EdU边缘清晰完整，检测更灵敏、更准确

图4 三种染料激发光谱和发射光谱（虚线：激发光谱；实线：发射光谱）

图5 三种染料分别检测EdU孵育2h的Hela细胞（40X）

图6 结合P65抗体和EdU，分析药物对细胞增殖及NF-KB信号通路的影响

图7 EdU增殖检测方法对各种细胞系均适用，简单、灵敏、快速、准确

EdU方法无需DNA变性，完全适用于各种显微成像技术，在10X，20X，40X都能得到很好的成像效果。