EdU，带你告别 Brdu 检测细胞增殖的烦扰？

丁香实验2012-09-29

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细胞增殖是评价细胞活性、代谢、生理和病理状况的重要指标。

EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，其连有的炔烃基团在天然化合物中很少见，能够在DNA复制时期代替胸腺嘧啶(T)渗入正在合成的DNA分子中，基于Apollo®荧光染料与EdU的特异性反应即可直接并准确地检测出DNA复制活性。

广泛应用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒繁殖等方面的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及各种药物的细胞增殖及活力筛选实验。

传统的免疫荧光染色（BrdU）检测方法需要 DNA 变性，抗原修复，抗原抗体过夜孵育，操作步骤复杂繁琐。

并且由于 BrdU 抗体分子较大，嵌入 DNA 分子中的 BrdU 无法直接与 BrdU 抗体结合，必须先进行 DNA 变性操作才能使 BrdU 抗原表位暴露，但变性的程度可能导致错误结果。

如果变性不充分，会导致 BrdU 难以暴露，无法检测，而且变性过程从边缘向中间渗透，会导致细胞核 DNA 的变性不均匀，边缘模糊不清。如果变性过分，则会导致 DNA 断裂，甚至降解，导致核染不均一。

另外，不同抗体试剂公司的抗体质量不一致，造成难以确保实验重复性，且容易产生假阳性结果。

图1 BrdU需要DNA变性，但变性过分或没有变性都可能容易导致BrdU结果假阳性

与 BrdU 方法相比，EdU 检测方法无需 DNA 变性，无需抗原修复，无需抗原抗体反应，更简单、更灵敏、更快速、更准确，是细胞增殖检测的最佳选择。

图2 BrdU与EdU检测原理示意图表1 BrdU与EdU检测优缺点比较

更准确--无需 DNA 变性(酸解、热解、酶解等)，可有效避免变性带来的样品损伤，确保细胞核边缘清晰完整；

更简单--无需抗原抗体反应，基于小分子化学反应的检测方法，简单高效，反应仅需要几分钟；

更灵敏--无需抗体，检测染料仅为BrdU抗体的1/500，更容易扩散，即使单个增殖细胞也能准确检测；

更快速--无需过夜，省却了抗原抗体反应的复杂繁琐步骤，完成整个检测周期仅需2.5小时；

更兼容--对样品几乎无损伤，更容易与多种抗体或荧光蛋白同时标记，能够同时检测细胞其他性状特征。

图3 BrdU需要DNA变性后才能与抗体结合，导致BrdU、Hoechst染色弥散，边缘模糊不清；而EdU边缘清晰完整，检测更灵敏、更准确

EdU 细胞增殖方法简单，方便，无需DNA变性，能够与各种抗体或荧光蛋白同时标记，以检测细胞其他性状特征。

图4 三种染料激发光谱和发射光谱（虚线：激发光谱；实线：发射光谱）

图5 三种染料分别检测EdU孵育2h的Hela细胞（40X）

EdU细胞增殖检测方法不需要剧烈的DNA变性操作，只需温和的细胞固定化和透化处理，能够较好地保护细胞形态、DNA 整体结构及细胞内抗原识别位点，更适合结合其他染料或蛋白标记（如P65抗体）等进行多重标记，从而在细胞水平获取更多的直观多维特征信息，更适合深入开展细胞功能方面的研究。

图6 结合P65抗体和EdU，分析药物对细胞增殖及NF-KB信号通路的影响

该方法无需DNA变性，无需抗原修复，无需抗原抗体反应，简单、灵敏、快速、准确，适合各种细胞系的细胞增殖检测，尤其适用于各种细胞系的高通量筛选实验，如在药物筛选中检测加药后细胞增殖变化。

图7 EdU增殖检测方法对各种细胞系均适用，简单、灵敏、快速、准确

EdU方法无需DNA变性，完全适用于各种显微成像技术，在10X，20X，40X都能得到很好的成像效果。

图8 A549细胞系孵育2h后的细胞增殖检测（10X, 20X, 40X）

以上就是 EdU，检测细胞增殖的的优势。