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BrdU 检测法检测细胞增殖

相关实验:细胞增殖检测实验

最新修订时间:

简介

5-溴-2'-脱氧尿嘧啶(5-bromo-2'-deoxyuridine, BrdU)是 DNA 前体胸腺嘧啶核苷类似物,通过竞争掺入 S 期细胞单链 DNA 核苷酸序列替代胸腺嘧啶。

近几年来,作为非放射性标记物,BrdU 可替代 H-TdR,避免了放射性污染问题,并同时具有敏感、简单和迅速的优点,因而用途十分广泛,对研究细胞动力学有重要意义,在肿瘤增殖细胞研究中有着特殊价值。

材料与仪器

器材:细胞培养箱、荧光化学发光分析仪。
 
试剂:
 
① BrdU 标记试剂。
 
② FixDenat 液。
 
③ Anti-BrdU-POD 反应液。
 
④ 抗体稀释液、洗涤液和底物等。

 

步骤

BrdU 检测法检测细胞增殖的基本过程可分为如下几步:

 

1、已接种到 96 孔板的细胞在相应抗原刺激 1—5 天后,加入 BrdU(10 μl/孔100 μl 培养液),细胞培养箱中共同孵育 2—24 小时。

 

2、室温下,2000 r/min,15 分钟离心,除去培养液。

 

3、加入 200 μl/孔 FixDenat 液,室温,30 分钟固定细胞。尽量除尽固定液。

 

4、加入 100 μl/孔 Anti-BrdU-POD 反应液,室温放置 90 分钟。

 

5、200 — 300μl/孔专用洗净液洗板 3 次,加入 100 μl/孔底物溶液,室温反应 5 — 10 分钟,利用荧光化学发光分析仪,波长 450 — 655nm 处读取发光强度,结果用 Ascent 软件处理,采用 Student'st 检验,P<0.05 示差异有统计学意义。

 

来源:丁香实验

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