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CFSE 染色法检测细胞增殖

相关实验:细胞增殖检测实验

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简介

荧光染料 CFSE,也称 CFDA SE(5,6-carboxyflu- orescein diacetate,succinimidyl ester)即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂,是一种可穿透细胞膜的荧光染料。

材料与仪器

仪器:流式细胞仪或荧光显微镜、离心机。

试剂:CFSE 试剂盒;灭菌纯水;细胞培养基;移液枪;枪头;15 ml 离心管。

步骤

1、根据试剂盒说明配制 CFDA SE 储存液和细胞标记液。

2、细胞正常培养及药物等处理后,收集细胞至 15 ml 离心管,用 1 ml CFDA SE 细胞标记液重悬细胞。

3、加入相应比例的 CFDA SE 储存液,轻轻混匀。

4、37 度孵育 10 分钟。

5、立即加入约 10 ml 细胞培养基,室温下轻轻颠倒混匀。

6、离心,去除上清液,加入 5 ml 细胞培养基洗涤一次。

7、离心后去上清,加入 5 ml 细胞培养基,37 度孵育 5 分钟。

8、再次离心,去上清。

9、加入细胞培养基重悬细胞,进行正常细胞的培养或处理等操作,后续可在荧光显微镜下直接观察细胞标记数目以反应细胞增殖情况,或用流式细胞仪检测细胞增殖情况。

注意事项

1、CFDA SE 的荧光近似于 FITC,外标抗体的荧光不能与之重叠。

2、试剂现用现配,如一次性配制,需注意使用时限。

3、荧光染料存在淬灭问题,实验操作尽量注意避光。

4、试剂盒内试剂若由沉淀,则需融解后再使用。

来源:丁香实验

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