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问
荧光定量pcr操作过程中加混样第一枪有残留怎么应对
Marchers
个人经验就是换一把移液器,或者找厂家校正一下;不需要打第二枪,浪费时间而且容易污染。
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问
qRTPCR操作中加完混配后,枪头打不干净怎么办
dxy_z857if55
在整个操作过程中保持加样操作的一致性就可以,例如都把枪头内液体都打干净或都忽略枪头内残留即可。
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问
U6内参qpcr茎环法的前链和后链可以用加尾法逆转录的cdna做吗?
仁心郎中1
可以用加尾法逆转录的做cdna
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问
求助qpcr扩增曲线和熔解曲线问题
毛利小五郎的徒弟
考虑还是引物的问题1.建议降低引物浓度;2.适当增加模板量;3.重新设计引物
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问
请问细菌PCR该怎么操作
huarenqiang5
菌落PCR是直接把菌通过枪头或其他物品转移到PCR体系中,在94℃变性时,细菌一般会被煮裂解,基因组和质粒直接被释放出来作为模板。
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问
做qpcr时,为什么基因检测出了结果,但是内参都没有检测出来???
balalaLy
内参引物降解了?内参使用太久会失效的。
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问
求助QPCR扩增曲线和熔解曲线起点高的问题!
Marchers
起点过高,可能是由于软件在进行基线自动扣除的时候出现错误,引起了扩增曲线抬升。建议手动调整基线,即可正常
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问
ABI7500机器无法关机是为什么呀
Marchers
荧光PCR如果没在工作的会,应该是可以正常关闭的。如果是公共平台的仪器,建议咨询技术员,或者自行联系厂家的人员
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问
求助,荧光定量无CT值
juyue2010
可能是没有设置,在每一个循环收集一次荧光信号
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问
逆转录添加RNA时,所有样本的RNA的量要相同吗?
balalaLy
要,一般用500-1000ng的RNA。
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问
家人们!为什么跑q一直跑不出来啊,应该不是cDNA不行,actin一直很齐
juyue2010
1.引物设计的可能有问题2,退火温度不正确
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问
定量的内参结果重复性比较好,但是样品的重复性很差,是什么原因?
genecreate
是不是目标基因的表达量在同组不同样本中,本来就差异较大
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问
请问有没有undefined到undefined的DNA聚合酶
毛利小五郎的徒弟
DNA聚合酶III这种酶既有5’→3’方向聚合酶活性,也有3’→5’核酸外切酶活性。该酶的活性较强,为DNA聚合酶Ⅰ的15倍,DNA聚合酶Ⅱ的300倍。他能在引物的3’-OH上以每分钟约5万个核苷酸的速度延长新的DNA链,是大肠杆菌DNA复制中链延长反应的主导聚合酶。
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问
各位大神,想问一下qPCR扩增曲线中为什么会有弧形的曲线?怎么解决?
五羟色胺5-HT
模板浓度过高,预变形时间不足,引物不特异等等原因。你调整下上述因素重新扩增试试
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问
提取RNA做逆转录,然后用逆转录的c DNA做荧光定量PCR。结果发现没有扩增成功,一直在0上下波动,是什么原因呢?
灵枢天问
是不是你的SYBR出了问题,失效了或者提出来的RNA降解了
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问
qPCR的图方差很大怎么办?
juyue2010
若是技术重复导致的话,是操作问题,先做好mix,再分别加到每个孔,操作时间别太长,加好样直接上机。若是生物重复导致的话,那就是说样品处理平行度差
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问
小鼠GAPDH内参可以扩大鼠吗
Marchers
可以用,鼠源的管家基因都是同源的,GAPDH都可以用
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问
第二次pcr跑出来的条带和第一次pcr跑出来的位置不一样,这是什么原因?
灵枢天问
可能是第一次的RNA有降解,逆转录出来的模板本身就有问题,所以p出来条带也有问题,太小了,你可以发个图片过来看看
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问
在做PEDV、TGEV鉴定时,需要阳性对照,可以用该病毒的疫苗做阳性对照吗
毛利小五郎的徒弟
一般都是用野毒株做阳性对照的。
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问
家人们,qpcr的数据p值是在grafpad里面算出来,直接标在数据上吗
juyue2010
graphpad统计分析后,在图上添加
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