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如何对不同批次实验进行板间校正
juyue2010
每次都检测标准曲线,或检测同一个片段
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问
qpcr内参一定要选择GAPDH嘛
dxyc42u
不一定非要选择GAPDH啊,βactin也是可以的
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问
不加反转录酶,其他成分相同的负对照作为NRT,结果应该是怎么样的?出现峰值正常吗?
毛利小五郎的徒弟
不正常,因为不加反转录酶是不会有产物的,也就不会有峰值
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问
RNA浓度在20纳克,但纯度很高,可以反转录吗?
dxyc42u
不可以,这个浓度的话跟空白对照都差不多了,所以不能
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问
pcr两条引物同时在一条链上会怎样?(两个都是正向引物)
huarenqiang5
这样一般是引物序列设计不合理,然而就可以导致位于5'端的引物合成到3'端的引物后无法继续进行,但是3'端的引物可以一直复制到3'末端 。
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问
pcr的时候目的基因比内参表达还高的原因是什么
小葡萄1
1.如果同管扩增,引物之间是否有竞争存在2.操作加样时是否有失误3.还有循环次数因素4.一次的现象不能下这样的结论,建议再重复几次。
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问
小鼠肾脏中采用RT-PCR,WB测NO相关指标结果与血浆NO浓度趋势不一致,该如何分析?
loveliufudan
这个情况有几种可能的解释:这个NOmRNA可能不是编码eNOS蛋白的mRNA,而是其他的与NO有关的mRNA。因此,你需要仔细检查你所测定的mRNA是哪一个。尽管NO蛋白和mRNA在生物学上都与NO的生物学功能相关,但它们的关系可能非常复杂。例如,NO的生物合成和降解是高度调节的,可能存在不同的机制来调节NO的生成和释放,以及调节eNOS的表达和稳定性。因此,这两个结果可能只是巧合。由于你使用了模
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T载和目的片段连接后提质粒用特异性引物跑PCR的问题,求大佬解答!!
毛利小五郎的徒弟
更换引物,这个结果说明引物差异性太大
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问
qPCR阴性曲线为什么这样
sswei
可能的原因是:污染;引物二聚体。最好电泳确认下。如果是探针法,可能的原因基本上是污染。如果是引物二聚体,那么适当调低引物的加量,如果始终有引物二聚体峰,而且认为有影响的话,那么只能更换引物。如果是污染,那么要注意以下方面的操作。模板添加区和混合液配制区最好分开。做PCR时,在混合液配制区直接把阴性的管子盖给盖上,然后将分装好的各个管子拿到模板添加区,按照低浓度到高浓度的顺序添加。加模板时,每次都要
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问
请问多重PCR的体系如何优化?
huarenqiang5
在选择多重PCR扩增条件(尤其是退火温度和时间)时应尽量选择有利于较大片段扩增的条件 (1)退火时间和温度在循环参数中,影响多重PCR扩增效率的主要因素是复性温度和延伸时间。复性温度的设置策略与单个PCR相似。先计算引物的熔解温度(Tm),在此基础上推算复性温度T。(T=T。-5)。然后用“逐步引人法”确定多重PCR的最佳T,即每增加一对引物,就根据扩增的结果调整复性温度,直至每一种被扩增的基因片
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问
用基因组DNA进行PCR怎么设计引物呢?手上没有DNA全序列,只有mRNA序列,该怎么办呢?
毛利小五郎的徒弟
只能反向设计,就是以mrna为模版设计。
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问
分子标记实验Pcr结果太糊
sswei
主要存在引物质量差,PCR反应扩增增强等所致。据此,需要更换引物,优化pCR反应流程。
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问
细胞进行转染后,可以通过什么实验检测转染效率?
sswei
可以通过以下方法检测:一、实时定量PCR检测实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。Real-time PCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的
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荧光定量PCR求教
dxyc42u
SD一般控制在0.2一下,ct值每个板子算每个板子,不能板间比较
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请问qpcr的目的基因cq值在多少范围合适呀?
申东熙老伯
cq值范围跟浓度相关,一般18-35个循环都可以。
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问
多重qPCR怎么样可以在一个反应条件下达到最优
毛利小五郎的徒弟
考虑是质粒没选好,才会扩增效率低
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问
急急急,求助!endnote打开后原来的文献全都不见了,怎么回事?
loveliufudan
可以试试用recovery my files软件(或者类似的恢复软件)查找一下,看看有没有恢复的可能。
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中国医药投稿
loveliufudan
审稿时间是可以有变化的,因为有很多的因素影响着审稿的速度,例如审稿人的工作量、审稿的难度以及编辑的工作计划等等。如果一个月已经过去了,那么您可以联系该杂志的编辑,询问审稿的进展。如果编辑告诉您审稿进展缓慢,您可以考虑投递到其他杂志。但是,在决定换杂志之前,请认真考虑其他因素,例如该杂志的影响力、发表论文的时间、审稿难度等,以决定是否真的需要换杂志。
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请教QPCR 上样顺序?
balalaLy
中途不需要离心的,全部加完贴膜之后再离心就行了。
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qpcr的3个复孔,其中一个cq值>0.5但是<1的孔可以纳入计算吗?
loveliufudan
Cq值的差距决定了是否可以纳入计算的标准。通常,差距小于0.5表示检测效率较高,可以纳入计算;差距大于0.5则说明检测效率较低,不可以纳入计算。对于Cq值差距为>0.5但是<1的孔,具体是否可以纳入计算需要根据实验具体情况判断。如果不确定是否纳入计算,可以考虑重新检测或使用其他方法来确定Cq值的正确性。
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