多重qPCR怎么样可以在一个反应条件下达到最优
dxy_ljusjmi2
各位大佬们，有个问题很想请教一下，在做两重qPCR的时候，（上面两条蓝色的是质粒，绿色的是样本）上面的这条质粒没有平台期，是斜向上的；下面这条在第42个循环数后有一个向上翘的趋势。可以帮忙解答下为什么会这样的原因吗？之前试过很多单重qPCR，也会有这样的情况。是质粒的问题吗？
还有一个就是样本的扩增效率不高，Ct值偏大，都＞30。每次实验下来的样本Ct值也都是比较大的，其中的原因是什么呢？
3 个回答
毛利小五郎的徒弟
考虑是质粒没选好，才会扩增效率低
dxy_ljusjmi2
有一个区域的质粒扩增有出现指数期，但是无法达到平台期，是不是有可能这对引物探针在这个区域的特意度不高？
loveliufudan
在qPCR实验中，斜向上的质粒增长趋势可能是由于质粒质量不稳定或受到污染导致的。在第42个循环数后出现上升趋势可能是反应没有达到完全平衡，或者是由于试剂或仪器造成的某些问题。在这种情况下，建议您考虑重新验证质粒质量，并进行完整的试剂和仪器检查。
样本扩增效率不高，导致Ct值较大的原因可能是因为样本含量较低，核酸质量不稳定或受到污染，或者扩增条件不合适。建议您检查样本的质量，并确认扩增条件是否合适，如温度和时间。同时，可以考虑使用更高的模板量或提高扩增时间来提高扩增效率。
此外，还可以考虑进行其他实验，如更改模板预处理方法，使用不同的试剂或仪器等，以确定导致问题的具体原因。
dxy_ljusjmi2
小姐姐，你好！就是因为是多重qPCR，之前测试过单重的，每对引物的tm值不一样。然后现在是在同一条件下进行多重qPCR，所以条件无法满足每个区域引物的tm值。在这种情况下我应该怎么样做会提高扩增效率呀？之前有试过增加模板量，但是效果也不太好
juyue2010
样品中目的基因copy数少，将两个引物的荧光集团互换，
dxy_ljusjmi2
你好，请问将荧光集团互换是什么意思？是重新设计探针的时候 把荧光标记重新设置一下吗？
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