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qpcr求助,溶解曲线双峰

相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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kDZ11

之前预实验目的基因和内参基因的溶解曲线都很好,今天做大量样本的时候目的基因溶解曲线出现了双峰,减少了引物浓度,结果没有改善,请问大佬们可能是什么原因,有可能是模板量太小扩增不好ct值太大吗,今天特意用的新的一管引物,我可能是depc处理水被污染了嘛?

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4 个回答

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yaonan120

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这个基因做了第一次正式实验,发现80度那里提前出来一个峰,觉得是引物二聚体。条件不变,再做一次还是差不多这样。不知道这是不是真的就是引物二聚体还是其他原因?如果是应该改怎么改变反应条件才能不产生引物二聚体?

反应体系如下:10ul体系 95度30秒 95度5秒 59度30秒 40个循环

SYBR mix 5

FP 0.4

RP 0.4

H20 3.2

CDNA 1

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Eason老歌迷

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引物二聚体,也可能是污染了,也可能是引物的非特异性扩增。可以做个温度梯度,或者试着提高退火温度可以降低引物二聚体。

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上北北大的cjy

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是不是cdna被污染了。两次都这样的话,可能是模板的原因

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天一湖医者

有帮助

有双峰,说明引物的特异性不好。每个峰值代表一个扩增产物。建议优化引物。

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