qPCR实验内参的值都比目的基因的值大，这正常吗。

在 qPCR 实验中，内参基因（也称为参考基因或稳定表达基因）应该具有相对稳定的表达水平，不受实验条件或处理的影响。它们通常用作标准化因子，用于对目的基因的表达进行相对定量。一般情况下，内参基因的表达值应该与目的基因的表达值接近。

如果在 qPCR 实验中发现内参基因的值普遍比目的基因的值大，这可能是由于以下原因之一：

1. 选择不合适的内参基因：内参基因的选择是关键步骤，应该选择具有稳定表达水平的基因作为内参。如果选择的内参基因在实验条件下发生了变化，就会导致内参值与目的基因值的差异。

2. 执行问题：在实验过程中可能存在技术操作上的问题，如反转录反应不均一、PCR扩增效率差异等，这些问题可能导致内参基因的表达值异常偏高。

3. 样本差异：如果样本之间存在差异，如基因表达水平的差异或处理效应，也可能导致内参基因的表达值与目的基因的表达值不一致。

当发现内参基因的值普遍比目的基因的值大时，建议进行以下措施：

- 重新评估内参基因的选择，确保选择的基因在实验条件下表达稳定。

- 检查实验操作步骤，确保操作的一致性和准确性。

- 考虑检查样本处理过程中是否存在系统性差异，可能需要重新优化实验流程或重复实验。

如果问题仍然存在，可能需要进一步评估实验设计和数据分析方法，或者尝试使用其他标准化方法或不同的内参基因进行校正。

内参的CT值是多少呢？一般来说，内参是属于管家基因，在不同细胞中都稳定表达的，因此在不同细胞或组织中表达量都比较高。个别目的基因的CT值比内参低是可能的，但都低就不大正常了，需要回溯一下是不是加样过程中存在问题，或者内参的引物是不是过期降解了等。

内参偏大说明选择的内参不合适，建议更换内参类型

可能原因：

1，内参引物效果不佳：可能原因是引物设计存在问题，比如存在引物二聚体等；另外，也有可能是引物使用时间过久或者保存不当，出现了降解。

2，RNA质量不好，比如260/280, 260/230值偏低；

3，反转时RNA含量过低；

4，定量时cDNA以及引物含量偏低；

一般不会，看一下目的基因引物特异性怎么样。线粒体基因可能会出现这种情况