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分子标记实验Pcr结果太糊

相关实验:分子标记— AFLP 原理和操作步骤

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呼斯乐5EVQ

总是好几个条带叠在一起,应该怎么处理呢?

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4 个回答

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sswei

有帮助

主要存在引物质量差,PCR反应扩增增强等所致。据此,需要更换引物,优化pCR反应流程。

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

纯化样本后再跑,目前看杂质污染。

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huarenqiang5

有帮助

主要模板中蛋白质没有消化除净造成的 。也不能排除引物质量、引物的浓度。

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loveliufudan

有帮助

如果你的PCR结果中有多个条带重叠在一起,可能会有多种原因,例如:

1.非特异性扩增:在PCR反应中,引物可能与多个目标区域结合并扩增出多个产物,因此会出现多个条带。

2.重复序列扩增:如果扩增目标区域中包含了重复序列,PCR反应可能会扩增出多个条带,这些条带的大小可能会非常相似。

3.杂交扩增:如果你使用的是多个引物进行PCR反应,这些引物可能会在某些位置发生杂交扩增,从而产生多个条带。

要解决这个问题,你可以尝试以下一些方法:

1.更换引物:尝试更换引物以增加PCR反应的特异性,或使用更短的引物来减少非特异性扩增。

2.优化PCR反应条件:你可以尝试优化PCR反应条件,例如降低引物浓度、改变温度梯度或增加扩增周期数等,以增加PCR反应的特异性。

3.增加退火温度梯度:如果使用多个引物,你可以尝试增加温度梯度,以减少引物间的杂交扩增。

4.尝试其他扩增方法:如果以上方法仍然不能解决问题,你可以尝试其他扩增方法,如nested PCR或touchdown PCR。

总之,通过优化PCR反应条件或更换引物,你可以尝试减少或消除多个条带的问题,以得到更清晰的PCR结果。

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