毛利小五郎的徒弟
可以测定转染后的荧光率来检测转染效率。
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pcr检测rna水平变化,wb检测蛋白变化
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常用的检测转染效率的方法如下:
细胞计数:通过染色和显微镜观察细胞中转染荧光标记的数量,并与未转染细胞进行比较。
RT-PCR:通过对转染细胞中的 RNA 进行实时荧光定量 PCR (RT-qPCR)分析,来检测目的基因的表达量。
蛋白质检测:通过免疫荧光或免疫印迹技术检测转染细胞中目的蛋白质的表达情况。
流式细胞仪:通过流式细胞仪对转染细胞进行分析,检测其中转染标记的数量和分布。
选择哪种方法取决于转染目的,转染基因的性质和要检测的生物学行为等因素。确定最佳的检测方法后,应该进行完整的实验设计和评估,以确保数据的准确性和可靠性。
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可以通过以下方法检测:
一、实时定量PCR检测
实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。Real-time PCR是在PCR扩增过程中,通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为定量的依据。但是,荧光定量PCR所检测的是转染后细胞中待测基因的mRNA的表达水平,对于目的基因的蛋白表达水平不能够检测;
二、Wester Blot检测
Western Blot又称蛋白质免疫印迹(免疫印迹实验),其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或者生物组织样品进行着色,并通过分析着色的位置和着色的深度获得特定蛋白在所分析的细胞或者组织中表达情况的信息。Western Blot所检测的是组织或者细胞中蛋白质的表达水平。
三、流式细胞术
流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)是一种在功能水平上对细胞或者其他生物粒子进行定量检测和分析的检测手段,它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中检测得到多个参数,与传统检测方法相比具有更加快速、准确以及定量等特点。使用流式细胞术检测转染效率可以更加精que的确定转染的效率,对转染效率进行量化。
四、荧光显微镜观察
当我们转染的质粒DNA含有荧光蛋白基因是,可以通过荧光显微镜观察的方法来确定转染的效率,在荧光显微镜下,可以观察到荧光的强弱以及荧光的效率。
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