等位基因特异性 PCR，也称错配 PCR（mismatch PCR）， 扩增耐突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）， 错配扩增突变分析（mismatch amplification mutation assay，MAMA），是相较单链构象多态性分析（single stnmd conformation polymorphism，SSC

荧光蛋白的实用性在于它可以实时的监测蛋白表达和定位。而很多情况下对这些蛋白的应用需要利用荧光激活的细胞分选仪（FACS）对细胞进行准确和定量地分析和分选。我们特别介绍利用 FACS 来分选有 EGFP（增强绿色荧光蛋白）表达和基因诱捕的内源性启动子的细胞。利用荧光报告基因进行基因诱捕为我们提供了一种敏感的方法来校准诱捕的基因表达水平和回收那些表达追踪基因的细胞。本方法将阐明以下几点：① 荧光载体转

荧光报告蛋白的多参数流式细胞术是使我们能够非介入式地区分不同的细胞群，或者在单个细胞水平来分析基因功能和蛋白-蛋白之间的相互作用的实验。目前，主要的方法有 ① 稳定表达 ECFP、EGFP、EYFP 和（或）DsRed 蛋白的细胞系的建立；② 四色荧光蛋白的同时检测；③ 其他同时检测 2、3 或 4 种荧光蛋白的方法共 3 种方法。

外周造血池动员的 CD34NEG 造血前体细胞表型和功能分析是在无血清培养条件下，研究原始CD34NEG CD38NEG LINNEG 细胞和CD34+ CD38NEG LINNEG 细胞增殖状态过程中 CD34 抗原表达调变的实验。

端粒长度是衡量细胞分化和衰老进程的重要指标。流式细胞仪分析测定端粒长度已成为繁琐的 Southern blotting 检测方法的重要补充。流式细胞仪可以对很少的细胞群体相当准确地测定端粒的长度，还可以同时分析不同荧光免疫表型细胞亚群。目前，用于荧光原位杂交和流式细胞术测定端粒长度实验的方法主要包括：定量测定端粒长度的试验和基于细胞表型的端粒长度定量的测定方法。

随着高速分选有活性的、传染性细胞和治疗性细胞样品需求的增加，保护流式细胞仪操作员的安全也相应显得尤为重要。通过 BSL-3 实验室确保分选活的、传染性细胞之前的样品密闭保护。这个程序包括气溶胶控制、物理屏障、环境控制和个人防护。气溶胶处理系统在分选室里面产生负压使气溶胶直接通过真空装置进入到高效粒子空气过滤器。物理屏障包括仪器制造厂的标准塑料防护罩和屏蔽面板。出于最大限度地考虑环境控制的原因，BS

流式细胞仪同步分析 DNA 和 RNA 分析提供了细胞的 DNA 含量和细胞转录状态的信息。这一分析方法可以通过利用与 DNA 结合的异染荧光物质以及由静电作用与单链 RNA 结合的异染荧光物质来检测 DNA 以及 RNA。分析的首要条件就是细胞的活性，所以应该使用新鲜处理的细胞。利用流式细胞仪同时分析 DNA/RNA 技术原先是被用于包括多发性骨髓瘤在内的血液恶性肿瘤的分类及生物学鉴定。

流式细胞术 DNA 含量检测提供了一种快捷和可信的 DNA 倍体和肿瘤标本中细胞增殖分数分析方法。保存的和新鲜的标本都适用于该技术，在肿瘤的早期阶段，包括乳腺癌、结肠癌、肺癌和膀胱癌，其所获得信息可以与传统的预后因素联合对这些肿瘤做出生物评价。

细胞周期的动态信息可以通过标记 5＇-BrdUrd 获得，BrdUrd 可以掺入到 DNA 的胸腺嘧啶位点上。检测 DNA 中的 BrdUrd 就可以计数 S 期的细胞，如果在不同时间间隔采集标本，就可以获得细胞周期动力学的信息。

哺乳动物蛋白-蛋白相互作用陷阱系统（MAPPIT）是基于对 I 型细胞因子受体信号传导机制的认识而设计的双杂交系统。「诱饵」多肽和「猎物」多肽与突变细胞因子受体嵌合体连在一起，后者的信号传导是受损的。在相应的配体刺激后，如果「诱饵」与「猎物」能相互作用结合，JAK-STAT 信号级联放大系统启动，诱导受控于 STAT3 响应 rPAP1（rat pancreatitis associat-ed p

通过多种方法检测体内外分子间相互作用，使得对细胞各种生命过程的研究更加方便。一种用来研究与活细胞动态生命过程有关的、分子间相互作用的非常有价值的工具，就是利用荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer，FRET）现象，加上使用选择性荧光素耦联的靶分子。许多报告都利用了荧光团耦合抗体用于FRET分析。然而，这些方法都局限于细胞外分子且必须有合适的抗

流式细胞和基因表达谱两项技术具有很多共同特征：涉及复杂的高精尖设备；能够提供方法分析那些独特的、常规手段不易获得的细胞；需要大量的数据分析和归档功能。但是，在一个特殊的、重要的概念上它们也有所不同：当细胞混合在一起时，流式细胞术（细胞分选技术与其相似）通过分析细胞的光学特性，将它们分成同质的细胞群，留待进一步研究，从而降低了细胞混合物的复杂性。而全基因表达谱技术则提供了某一个特定生物标本内所有基因

Hoechst 33342 和 Rhodamine123 染色分析造血干细胞特征是鉴于体外活体染料 Rhodamine123 (Rh123) 和 Hoechst 33342 (Ho) 已经被证实是分析原始造血干细胞 (PHSCs) 的特性，鉴定、分离和纯化的十分有效的探针，将与干细胞密切相关的群体区分开来。目前，分析造血干细胞特征采用方法为 Hoechst 33342 和 Rhodamine123

多重 PCR (multiplex polymerase chain reaction, MPCR) 也称复合 PCR，是在常规 PCR 基 础上改进并发展起来的一种新型 PCR 扩增技术，即可在一个反应体系中加入两对以上引物，同时扩增出多个核酸片段，由 Chambehian 于 1988 年首次提出，其反应原理、反应试剂和操作过 程与常规 PCR 相同。多重 PCR 既有单个 PCR 的特异性和

T 细胞通过 T 细胞抗原识别受体识别特定抗原分子（表位），机体的 T 细胞池虽然可以针对多种抗原表位产生应答，但针对一个特定的抗原表位只有特异性 T 细胞才能产生应答。与抗原提呈细胞上的 MHC-抗原肽复合体结合刺激 T 细胞后，T 细胞可以发生增殖反应并产生细胞因子。四聚体结合技术和酶联免疫斑点技术（ELISPOT）已被用于检测 T 细胞池中能与特定抗原肽结合或对特定抗原肽刺激分泌细胞因子的

细胞因子流式细胞术（Cytokineflowcytometry，CFC）是指应用抗细胞因子抗体来分析作为细胞活化标志细胞因子的流式细胞术的统称。此技术最常见的应用是对经体外短时间活化并固定和通透的细胞进行细胞内细胞因子的标记。当用特异抗原刺激时，此技术可以对稀有的抗原特异的T细胞进行定量分析。

全基因组 PCR，又称全基因组扩增 (whole genome amplification, WGA)，是一种对全部基因组序列进行非选择性 扩增的技术，主要目的是在如实反映基因组全貌的基础上最大限度地增加 DNA 的量，在没有序 列倾向性的前提条件下对微量组织、单个细胞的整个基因组 DNA 进行扩增，为后续的多基因、 多位点分析及基因组的全面研究提供足量的 DNA 模板。目前，用于全基因组 PCR

单分子 PCR，又称 homo-primer PCR，是一个 DNA 分子为模板，循环数无限的 PCR 技术。PCR 技术发展到今天，已经相当成熟，并衍生出许多新技术，如 RT-PCR、 RAPD、AFLP、 反向 PCR、巢氏 PCR、热启动 PCR、菌落 PCR 和实时 PCR 等。一般而言，为了有效地扩增出目 的 DNA, 反应体系中添加较多量的模板，反应程序中使用较少的循环数。如果模板量过

植物组织含水量是植物水分状况的一个重要指标。植物组织含水量不但直接影响植物的生长、气孔状况、光合作用，甚至影响作物产量，而且还对果蔬品质以及种子和粮食的安全贮藏具有至关重要的作用。所以，学习测定植物组织含水量在植物水分生理研究中具有重要的意义。

单核苷酸多态性 (single nucleotide polymorphism, SNP), 是美国 MIT 人类基因组中心负责 人 Lander E S 等人于 1996 年发现的新一代遗传标记，它主要是指在基因组水平上由单个核苷酸 的变异所引起的 DNA 序列多态性，即指基因组内特定核苷酸位置上，存在两种不同的核苷酸， 且其出现的频率大于 1% , 如果出现频率低于 1%，则看作点突变。它是人