等位基因特异性PCR
别名：
错配 PCR (mismatch PCR)，扩增耐突变系统 (amplification refractory mutation system，ARMS)，错配扩增突变分析(mismatch amplification mutation assay，MAMA)
最新修订时间：
简介
等位基因特异性 PCR，也称错配 PCR（mismatch PCR）， 扩增耐突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）， 错配扩增突变分析（mismatch amplification mutation assay，MAMA），是相较单链构象多态性分析（single stnmd conformation polymorphism，SSCP）、限制性片段长度多态性分析（restriction fragment length polymorphism，RFLP）、异源双链分析（het eroduplexanalysis，HA）更为简便、快速，易于检测大量标本的 PCR 方法。
原理
等位基因特异性 PCR 的基本原理是，Taq DNA 聚合酶缺少外切酶活性，在一定条 件下，PCR 引物 3' 末端的错配导致产物的急剧减少，针对不同的已知突变，设计适当的引物， 可以通过 PCR 方法直接达到区分突变型与野生型基因的目的。该方法要求制备 3 个 PCR 引物， 其中 2 个引物分别含有待测 DNA 中突变位点的突变碱基及正常碱基，另外一个为正常对侧引 物。当分别经过 PCR 扩增后，正常引物仅将正常 DNA 扩增出，而含突变碱基的引物将突变 DNA 链扩增出，然后用普通琼脂糖凝胶电泳检测有无扩增产物。
根据基因组已知的突变区及保守区，设计出三条引物，其中上游引物设计 2 条，其区别仅为 3' 末端的碱基不同，一个为等位基因 1 特异的引物（ASP1， 3' 末端为 A），另一个为等位基因 2 特异的引物（ASP2， 3' 末端为 C），下游引物（CON）设计在相对保守的位置。然后对于含有等 位基因 1 和等位基因 2 的基因组，分别用 ASP1. ASP2 与下游保守引物（CON）配对进行 PCR， 反应条件相同。再后进行结果检测。当用等位基因 1 DNA 为模板时，用 ASP1 与下游保守引物（CON）配对进行 PCR 得到了有效扩增，而用 ASP2 与下游保守引物（CON）配对进行 PCR 则 无扩增；当用等位基因 2DNA 为模板时，用 ASP2 与下游保守引物（CON）配对进行 PCR 得到 了有效扩增，而用 ASP1 与下游保守引物（CON）配对进行 PCR 则无扩增。
来源：丁香实验团队
操作方法
等位基因特异性 PCR，也称错配 PCR（mismatch PCR）， 扩增耐突变系统（amplification refractory mutation system，ARMS）， 错配扩增突变分析（mismatch amplification mutation assay，MAMA），是相较单链构象多态性分析（single stnmd conformation polymorphism，SSC
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