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染色质免疫共沉淀测序(chip-seq)
染色质免疫沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP)是目前唯一研究体内 DNA 与蛋白质相互作用的方法,主要包括 ChIP-qPCR 和 ChIP-seq 两种。利用 ChIP-seq 技术能够高效地在全基因组范围内检测与组蛋白修饰、转录因子等互作的 DNA 区段。
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染色质免疫沉淀
染色质免疫沉淀法(chromatin immunoprecipitation,ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在,研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。ChIP利用抗原抗体反应的特异性,可以灵敏地检测目标蛋白与特异DNA片段的结合情况,是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域、与特定基因组区域结合的蛋
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植物多倍体人工诱导实验
植物多倍体是指每个细胞内染色体组有三套以上的植物。自然界中常见的植物以二倍体居多,研究发现了一些天然多倍体,其染色体数目增多,生长健壮、器官增大、营养物质含量增高,抗逆性增强,是理想的育种材料。除了天然的多倍体外,其实人工也可以诱发多倍体。人工诱导多倍体方法有很多,比如:物理诱导多倍体、化学诱导多倍体和其他方法。
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非程序 DNA 合成检测实验
非程序 DNA 合成(Unscheduled DNA Synthesis:UDS)即 S 期外的 DNA 合成。在一般情况下细胞内 DNA 合成只见于 S 期,但当处于非 S 期细胞 DNA 受损伤时,随着 DNA 损伤的修复也将发生 DNA 合成现象,即 UDS。
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利用 DNA 池技术进行纯合子定位实验
传连锁定位就是根据一些相关个体以远大于偶然因素共患某种疾病的现象来鉴定这些人共同享有的疾病基因区域。下面将要介绍的 DNA 池技术对于定位某些家系内患者都享有从共同祖先传递下来的一段基因组纯合区域的常染色体隐性遗传疾病尤其适用这些家系包括从家系信息提示受累个体来源于共同祖先的近亲家系。同时,这种方法对于定位受累个体由于具有相同的表型而且来自于同一个遗传隔离群从而有可能从共同祖先遗传同种疾病也是适用
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点突变不易扩增突变系统(ARMS)分析实验
ARMS 技术建立在观察所给的 DNA 序列的附属寡核苷酸链上,除了一个在适当的条件下作为 PCR 引物没有功能的错配的 3'端,由于 ARMS 检测的可靠性,当在非目的等位基因中尽量减少错误的引物时就有必要确定一个将产生可检测的等位基因的 ARMS 产物的联合的引物序列和反应条件。
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微阵列中期分裂相染色体的比较基因组杂交(CGH)实验
染色体 CGH 的独特优点在于它的全基因筛查功能,与检测单一靶 DNA 剂量改变的低通量方法,如 Southern 分析、PCR 和荧光原位杂交(FISH) 相比,速度显著提高且省力。目前染色体 CGH 是一种比较完善的分子细胞遗传学方法,但是它的两个缺陷限制其作为一种综合性筛查工具的应用。
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酵母遗传学方法实验
酵母被认为是一种理想的用于生化和遗传学研究的真核微生物。尽管酵母比细菌的遗传性状复杂,但许多用于原核微生物及其病毒的分子遗传学技术同样适用于酵母研究。酵母特别适合于遗传学研究的一些属性包括:存在稳定的单倍体和二倍体细胞、生长快速 、无性繁殖 、简便的平板影印 、突变体分离以及通过微解剖四分体子囊从而分离得到减数分裂的每一种单倍体产物的能力。
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果蝇 X 染色体隐性突变的检出实验
突变是非常普遍的生物学现象 , 但突变的检测却是一项复杂而繁琐的工作 , 特别是对于具有庞大基因组的高等动植物来说。
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细菌接合与基因定位—中断杂交
是通过物理手段中断细菌结合作用进行范围定位的方法。
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缺失定位—基因精细结构分析
缺失定位是将待测突变位置的菌株与一系列已知缺失区域的突变株分别进行重组,根据能否重组而确定待测突变菌株缺失位置的一种基因定位方法。
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植物细胞叶绿体 DNA 的分离纯化
叶绿体是植物细胞中特有的细胞器,其内含有 DNA。叶绿体 DNA 呈环状,高等植物的叶绿体 DNA(cpDNA)在 120~160kb 之间大小不一,现已发现的最大叶绿体 DNA 达到 217kb。
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植物细胞线粒体 DNA 的提取
在真核生物中,除核基因组外,还存在细胞质基因组,即线粒体基因组和绿色植物中的叶绿体基因组。线粒体基因组和叶绿体基因组均为环状分子,它们的大小随物种的不同而有所变化。线粒体 DNA(mtDNA)的大小介于 200~2500kb 之间。细胞器基因组在遗传方式、基因组大小与结构、基因编码容量、基因表达与调控等方面均不同于核基因组,而且叶绿体、线粒体基因组又各具自身特点。核、质基因组在功能上的相互协调,是
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DNA 探针的非同位素标记技术
DNA 探针分为两类:同位素标记的探针和非同位素标记的探针。同位素标记的探针通常有很高的放射比活性,杂交的灵敏度高,但使用期限短,且有放射性危害,污染物处置困难,需要特殊的仪器和设备,不适用于普通实验室。近年来非同位素标记法得到很大发展,如酶促标记法(如生物素、地高辛标记法)和化学标记法(如荧光生物素、酶标记法)。非同位素标记的探针保存时间较长、避免了同位素的污染,但不及同位素标记探针敏感。
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基因互补实验
基因是生物遗传物质的最小功能单位,基因是可分的。要确定一个基因的界限,不能依赖不同突变型之间的重组频率,而必须进行功能分析。通过突变体的互补作用进行互补测验来确定基因的界限。所谓互补作用是指两个突变型染色体同处于一个细胞,由于相对应野生型基因的互相补偿而使其表型正常化的作用。如果说重组是DNA分子之间直接相互作用的话,那么互补则是在基因表达水平上的作用。互补测验有两个基本条件:①两个突变型染色体同
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λ噬菌体DNA限制性内切酶图谱分析
λ噬菌体是分子遗传学研究中常用的生物材料,其DNA的酶切片段常作为测定DNA分子量大小的标准物。限制性内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异碱基序列的DNA水解酶,主要存在于原核细胞中。根据这些酶的差别,可分别命名为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。Ⅰ型和Ⅲ型限制性内切酶在同一蛋白分子中兼有修饰(甲基化)作用及依赖于ATP的限制(切割)活性,但不能在特异序列中降解DNA,因此在它的酶图谱分析与分子克隆中很少应用,主要
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并发转导与基因定位——三点杂交实验
两个基因间的距离可通过二点杂交和三点杂交后子代中重组体数目来测定。两基因之间的距离越近,其间发生交换的几率越小,重组体数目越少。同样,二点杂交和三点杂交也可用于基因内精细结构的分析。来源:《遗传学实验教程》
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λ噬菌体的局限性转导实验
λ噬菌体是一种温和噬菌体,在大肠杆菌宿主细胞内其DNA可整合在宿主染色体上,如同细菌的基因一样传递给子代细胞,此为溶原状态。在溶原菌中,λ噬菌体有两种选择:①溶原生长:即继续维持其溶原状态;②裂解生长:在某些物理化学等因素的诱导下,λ噬菌体借助宿主细胞的酶系统,开始有序的复制、转录、表达,装配成完整的噬菌体颗粒,最后裂解宿主细胞,释放出大量具有感染能力的成熟噬菌体。紫外线是一种常用物理诱导因素。不
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亚硝基胍的诱变作用与营养缺陷型菌株的筛选实验
从自然界得到的野生型菌株一般都能在基本培养基上生长。经物理或化学因子处理后,部分野生型细胞的基因发生突变,丧失合成某种必需物质(如氨基酸、维生素、碱基等)的能力,因而不能在基本培养基中生长,只有在基本培养基中补加这种物质时才能生长。这种在营养上表现出某种缺陷的变异菌株,称为营养缺陷型菌株,它是遗传学、分子生物学研究以及实际应用中不可缺少的重要材料。来源:《遗传学实验教程》
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粗糙脉胞菌顺序四分子分析实验
粗糙脉胞菌(Neurosporacrassa)属于真菌中的子囊菌纲,是进行顺序四分子分析的好材料。粗糙脉胞菌的菌丝体是单倍体(n=7),每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。由菌丝顶端断裂形成的分生孢子有两种:小型分生孢子中含有一个核,大型分生孢子中含有几个核。分生孢子萌发成菌丝,可再生成分生孢子,周而复始,形成粗糙脉胞菌的无性生殖过程。来源:《遗传学实验教程》
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