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λ噬菌体的局限性转导实验

实验分类:

遗传学实验

最新修订时间:

简介

λ噬菌体是一种温和噬菌体,在大肠杆菌宿主细胞内其DNA可整合在宿主染色体上,如同细菌的基因一样传递给子代细胞,此为溶原状态。在溶原菌中,λ噬菌体有两种选择:①溶原生长:即继续维持其溶原状态;②裂解生长:在某些物理化学等因素的诱导下,λ噬菌体借助宿主细胞的酶系统,开始有序的复制、转录、表达,装配成完整的噬菌体颗粒,最后裂解宿主细胞,释放出大量具有感染能力的成熟噬菌体。紫外线是一种常用物理诱导因素。不过,当溶原菌(供体菌)经紫外线诱导产生的噬菌体颗粒中极少数(约10-4)带有细菌gal基因,而噬菌体则失去自身的部分DNA片段时,这种噬菌体称之为缺陷噬菌体,用λdg表示。这种噬菌体所进行的转导为低频转导(lowerfrequencytranslocation,LFT)。用这种低频转导噬菌体裂解液以高感染复数(HIF)感染另一非溶原性gal-受体菌,λdg不仅能进入细胞,而且能和正常λ噬菌体一起整合到受体细胞染色体上去,使之成为双重溶原菌。双重溶原菌经诱导后,噬菌体同样能复制并释放出约占噬菌体总数50%的具有半乳糖发酵基因能力的噬菌体。这些转导噬菌体所进行的转导称为高频转导(HFT)。来源:《遗传学教程》

来源:丁香实验

操作方法

基本方案

(一)噬菌体裂解液的制备1.将供体菌接入5mlLB培养液中,37℃振荡培养过夜。2.取0.5ml过夜培养物转入另一支5mlLB培养液试管中(剩余的菌液置冰箱保存,备用),37℃继续培养4~6h。3.将培养物转入10ml无菌离心管中,4℃3000r/min离心10min。4.去上清液,加1ml的磷酸缓冲液(0.1mol/L,pH7.0),振荡悬浮,再加入4ml同样的缓冲液制成菌悬液。5.取2ml菌悬

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