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酵母遗传学方法实验

实验分类:

遗传学实验

最新修订时间:

简介

酵母被认为是一种理想的用于生化和遗传学研究的真核微生物。尽管酵母比细菌的遗传性状复杂,但许多用于原核微生物及其病毒的分子遗传学技术同样适用于酵母研究。 


酵母特别适合于遗传学研究的一些属性包括:存在稳定的单倍体和二倍体细胞、生长快速 、无性繁殖 、简便的平板影印 、突变体分离以及通过微解剖四分体子囊从而分离得到减数分裂的每一种单倍体产物的能力。 

应用

酵母已经被成功地用于遗传学研究的各个领域 ,例如 :诱变 、重组 、染色体分离 、基因表达和调控以及一些明显不同于真核生物系统的方面 ,比如线粒体遗传学等 。

来源:丁香实验

操作方法

技术和方案1 酵母的高效转化

技术和方案2 快速粗放的酵母菌落质粒转化法

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技术和方案3 酵母 DNA 分离

一、酵母 DNA 微量制备(40 ml) 1.在 125 ml 三角瓶中用 40 mlYPD 培养液在 30°C 条件下培养细胞达最大生长量(过夜)。 2.将上述培养物移入螺盖离心管,用医用离心机或 SarvallSS-34 转头以 5000r/mm 离心 5 min,弃去上清液。 3.将细胞悬浮在 3 ml 的 0.9mol/L 山梨醇-0.lmol/LNa2E

技术和方案4 酵母蛋白质的抽提

1.从液体培养物中或用细菌接种环在平板表面刮菌,收集大约 2.5 OD的细胞量(大约 2.3 mg 湿重)。将细胞重悬于 100ul 蒸馏水中,加入 100ul O.2mol/L NaOH,将样品室温放置 5 min。 2.离心沉淀样品,并将其重悬于 50ul PAGE 样品缓冲液中。将样品于沸水中煮 3 min 并再次离心沉淀。用移液器吸取含有蛋白质的上清,每个泳道用 6ul 上清上样,在小型

技术和方案5 TAP纯化方法

1.培养 3~6L 细胞至浓度为 2X107~3X107 个/ml(OD50=1.0~1.3)。 2.离心收集细胞,并用冰预冷的水洗一次。 3.用冰预冷的 NP-40 缓冲液再洗一次后,转移到 50 ml 的离心管中。 4.离心收集细胞,用 10 ml NP-40 缓冲液重新悬浮细胞。 5.向干冰预冷的研磨杵和臼中加入液氮。在液氮挥发时,逐滴往磨臼内加入细胞。并注意添加液氮以保持细胞的冷冻

技术和方案6 酵母 RNA 的分离

大量 RNA 分离程序 酵母总 RNA 的分离 1.在每毫升培养物中加入 50ug 环乙酰亚胺,在 30°C 下摇晃 15 min。此步骤亦可省略,但是有人认为此步可防止 mRNA 凝集在多聚核糖体上。 2.迅速冷却收集细胞,在大离心瓶(Sorvall GS 或类似型号)中加入约一半体积的碎冰,将培养物倒入至盖过冰面,振荡,4°C,5000r/min 离心 5 m

技术和方案7 质粒 DNA 的羟胺突变

1.临用之前制备羟胺溶液,置冰上待用。 2.将用 CsCl 纯化的 10 埤质粒 DNA 加到含 500ul 羟胺溶液的微量离心管中。 3.在 37°C 下温育 20 h。 4.加人 10ul 的 5mol/L NaCl,50 ul 1mg/ml 的牛血清白蛋白(BSA) 和 1ml 无水乙醇以终止反应,置 -70°C 10 min 以沉淀 DNA。 5.离心 10min,小心倾其所有上清

技术和方案8 酵母β-半乳糖苷酶的测定

技术和方案9 羧肽酶 Y 的平板鉴定

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技术和方案10 随机孢子分析

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技术和方案11 酵母活细胞染色

技术和方案12 酵母免疫荧光法

技术和方案13 已固定细胞的肌动蛋白染色

鬼笔环肽专一性地结合 F 肌动蛋白,荧光标记的鬼笔环肽染细胞与肌动蛋白抗体的染色模式类似。 1.在 500 ml 三角瓶中振荡培养 25 ml 酵母菌至密度为 2X107 个/ml。 2.添加 17 ml 10% 甲醛(EM 电子显微级)到培养基中至终浓度 4%,在酵母菌生长温度下固定细胞 10 min。 3.2000~3000r/min 离心 5 min,收集细胞。 4.在 6 ml 加

技术和方案14 PCR介导基因破坏法

技术和方案15 酵母菌落PCR

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技术和方案16 分光光度法测酵母细胞密度

1.从培养瓶中取 1 ml 细胞培养物,置于微量离心管中。如果有必要,稀释细胞至OD660<1。 2.超声细胞确保细胞计数准确,转移细胞到测量杯中。用细胞生长培养基作为空白对照,在测量样品前将吸光度调零。 3.测量每个样品的 OD660。 4.按照表 16.1 的方法计算单倍体细胞密度,二倍体细胞的密度是单倍体细胞密度的一半。 注意:在不同的

技术和方案17 细胞同步化

技术和方案18 染色质免疫沉淀

1.培养要分析的细胞。每一个样品,需要在三角瓶中培养 50~100ml 细胞至 OD600 大约为 1。 2.甲醛处理细胞交联蛋白质和 DNA。加甲醛到细胞中至终浓度为 1%(37% 的甲醛按 1:36 与细胞悬液混合),在室温维持 10~120 min,期间颠倒几次。 >注意:最佳的固定时间对不同的蛋白质是不同的,对于不同的分析要加以优化。 3.制备加有蛋白酶抑制剂的裂解/免疫沉淀缓

技术和方案19 酵母 DNA 流式细胞记数

1.生长和收集细胞。细胞生长至 5X106 个/ml,离心收集 10 ml 样品,并用 5 mlTE 缓冲液洗一次。再次离心收集并悬浮在 1.5 ml 水中。 2.乙醇固定细胞。每份 1.5 ml 样品中加人 3.5 ml 无水乙醇,使乙醇的终浓度达 70%。 在室温中放置 1h,如有必要,可在 4°C 放置样品。 3.洗去乙醇并超声波处理分散细胞。离心收集细胞并用 5 ml TE 缓冲液洗

技术和方案20 对数生长

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