材料与仪器
TE 缓冲液 胃蛋白酶溶液 SYTOX Green 染色缓冲液
步骤
1.生长和收集细胞。细胞生长至 5X106 个/ml，离心收集 10 ml 样品，并用 5 mlTE 缓冲液洗一次。再次离心收集并悬浮在 1.5 ml 水中。
2.乙醇固定细胞。每份 1.5 ml 样品中加人 3.5 ml 无水乙醇，使乙醇的终浓度达 70%。
在室温中放置 1h，如有必要，可在 4°C 放置样品。
3.洗去乙醇并超声波处理分散细胞。离心收集细胞并用 5 ml TE 缓冲液洗一次。超声波处理分散细胞（每次 5~10s，共 3 轮）
4.核酸酶处理细胞。Tris 缓冲液稀释核酸酶储存液至 1mg/ml(IX)。离心收集细胞，移去缓冲液并加入 2 ml IX 核酸酶溶液重新悬浮。37°C 振荡温育样品 lh，如有必要可 4°C 过夜。核酸酶消化充分十分关键，这一步可以通过在荧光显微镜下观察细胞来检测。细胞核因染色会非常明亮，而细胞质除线粒体 DNA 之外不会被染色。
5.胃蛋白酶处理细胞。离心收集细胞并用新鲜配制的 1~2 ml 胃蛋白酶溶液悬浮，室温温育样品 5 min。
6.SYTOX Green 染细胞，方法见 Haase 和 Reed(2002)。配制 SYTOX Green 的 TE 缓冲液（pH7.5)，每 2.5 ml 的 50 mmol/LTE 缓冲液中加入 1ul SYTOX Green。每份样品加入0.5 ml 的 SYTOX Green 的 TE 缓冲液，使 SYTOX Green 终浓度为 1umol/L。
2.乙醇固定细胞。每份 1.5 ml 样品中加人 3.5 ml 无水乙醇，使乙醇的终浓度达 70%。
在室温中放置 1h，如有必要，可在 4°C 放置样品。
3.洗去乙醇并超声波处理分散细胞。离心收集细胞并用 5 ml TE 缓冲液洗一次。超声波处理分散细胞（每次 5~10s，共 3 轮）
4.核酸酶处理细胞。Tris 缓冲液稀释核酸酶储存液至 1mg/ml(IX)。离心收集细胞，移去缓冲液并加入 2 ml IX 核酸酶溶液重新悬浮。37°C 振荡温育样品 lh，如有必要可 4°C 过夜。核酸酶消化充分十分关键，这一步可以通过在荧光显微镜下观察细胞来检测。细胞核因染色会非常明亮，而细胞质除线粒体 DNA 之外不会被染色。
5.胃蛋白酶处理细胞。离心收集细胞并用新鲜配制的 1~2 ml 胃蛋白酶溶液悬浮，室温温育样品 5 min。
6.SYTOX Green 染细胞，方法见 Haase 和 Reed(2002)。配制 SYTOX Green 的 TE 缓冲液（pH7.5)，每 2.5 ml 的 50 mmol/LTE 缓冲液中加入 1ul SYTOX Green。每份样品加入0.5 ml 的 SYTOX Green 的 TE 缓冲液，使 SYTOX Green 终浓度为 1umol/L。
来源：丁香实验
