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    技术和方案9 羧肽酶 Y 的平板鉴定

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    最新修订时间：

    材料与仪器

    步骤

    程序 改编自Jones操 作 步 骤 （1981) 1 ) 在 YPD平板上培养菌落或菌苔（ 通常菌落长3 天，菌苔长1 天即可）。 2 ) 小心把覆盖液加在平板的表面使之完全覆盖细胞。 3 ) 待琼脂凝固5〜lOm in后 ，小心用新鲜Fast Garnet GBC溶液冲刷表面。 4 ) 显 色 5m in，野生型菌株将变红，而羧肽酶Y 阴性菌株将呈现黄色或粉红色。 5 ) 倒 出 Fast Garnet溶液以便更好地观察颜色变化。 材料和溶液 覆 盖 液 （ 用于一个平板的量） 在玻璃或聚丙烯试管中，将 2.5m l的 lm g/m lN -乙酰-DL-苯丙氨酸-斤萘酯（ 溶在 二甲基甲酰胺中）与 4m l熔化的0.6%琼脂混合，保温在50°C 。 Fast Garnet GBC溶 液 （ 每个平板用5m l) 5mg/ml Fast Garnet GBC (硫酸盐，Sigma F8761)溶于 0•lm o l/L Tris-HCl (pH 7. 4) 二甲基甲酰胺促进细胞的通透性。细胞中的羧肽酶Y 切 割 ％ 乙酰-DL-苯丙氨酸-斤- 萘酯的酯键，游离的炊萘酚与重氨盐Fast Garnet GBC反应产生一种不溶性的红色 沉淀。

    来源：丁香实验

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