酵母遗传学方法8：酵母活体染色

酵母活体染色

 

1 ）核 DNA 和线粒体 DNA

 

1． 当细胞培养到约 10⁷ 细胞 /ml 时，离心（ 5 秒）收集细胞，再悬浮在 70 ％乙醇中。

2． 固定 5 分钟或 5 分钟以上，用水洗 2 次。

3． 将细胞悬浮在含有 50ng/ml 的 4 ， 6- 二脒基 -2 苯基吲哚的封固剂中。 1mg/ml 的 4 ， 6- 二脒基 -2 苯基吲哚母液可在－ 20 ℃下贮存。

4． 用紫外滤片观察。

 

 

2 ）线粒体

 

1． 在生长培养基中培养细胞达到约 10⁷ 细胞 /ml 时，加入 100ng/ml 3 ， 3’- 二已基�羰花青碘化物（ DiOC₆ ， Sigma D₃₆₅₂ 或 Molecular Probes ）用乙醇把 1mg/ml 母液稀释到 1/10⁴ 。

2． 培养 5 分钟或 5 分钟以上，用荧光素滤片观察。

 

 

3 ）液泡

 

1． 当细胞生长到约 10⁷ 细胞 /ml 时，离心收集细胞（ 5 秒），悬浮在含有 50mmol/L 柠檬酸钠（ pH4.0 ）的 YPD 中。

2． 加 CDCFDA （羧基 -2’,7’- 二氯 - 荧光素双乙酸盐）到终浓度为 10 μ mol/L 。

3． 保温 10 分钟或 10 分钟以上，用荧光滤片观察。

 

 

4 ）牙痕和几丁质

 

1． 用生长培养基培养细胞达 10⁷ 细胞 /ml 时，加 100 μ g/ml Calcofluor （荧光发光剂 28 ； Sigma F3543 ）（用水将 1mg/ml 母液稀释到 1/10 ，母液可在－ 20 ℃下黑暗保存数星期）。

2． 培养 5 分钟或 5 分钟以上，用水洗 2 次，用紫外滤片观察。