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酵母活体染色

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3741

1 )核 DNA 和线粒体 DNA

 

1. 当细胞培养到约 107 细胞 /ml 时,离心( 5 秒)收集细胞,再悬浮在 70 %乙醇中。

2. 固定 5 分钟或 5 分钟以上,用水洗 2 次。

3. 将细胞悬浮在含有 50ng/ml 4 6- 二脒基 -2 苯基吲哚的封固剂中。 1mg/ml 4 6- 二脒基 -2 苯基吲哚母液可在- 20 ℃下贮存。

4. 用紫外滤片观察。

 

 

2 )线粒体

 

1. 在生长培养基中培养细胞达到约 107 细胞 /ml 时,加入 100ng/ml 3 3’- 二已基噁羰花青碘化物( DiOC6 Sigma D3652 Molecular Probes )用乙醇把 1mg/ml 母液稀释到 1/104

2. 培养 5 分钟或 5 分钟以上,用荧光素滤片观察。

 

 

3 )液泡

 

1. 当细胞生长到约 107 细胞 /ml 时,离心收集细胞( 5 秒),悬浮在含有 50mmol/L 柠檬酸钠( pH4.0 )的 YPD 中。

2. CDCFDA (羧基 -2’,7’- 二氯 - 荧光素双乙酸盐)到终浓度为 10 μ mol/L

3. 保温10 分钟或 10 分钟以上,用荧光滤片观察。

 

 

 

4 )牙痕和几丁质

 

1. 用生长培养基培养细胞达 107 细胞 /ml 时,加 100 μ g/ml Calcofluor (荧光发光剂 28 Sigma F3543 )(用水将 1mg/ml 母液稀释到 1/10 ,母液可在- 20 ℃下黑暗保存数星期)。

2. 培养 5 分钟或 5 分钟以上,用水洗 2 次,用紫外滤片观察。

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