DNA 探针的非同位素标记技术

实验分类：

遗传学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

DNA 探针分为两类：同位素标记的探针和非同位素标记的探针。同位素标记的探针通常有很高的放射比活性，杂交的灵敏度高，但使用期限短，且有放射性危害，污染物处置困难，需要特殊的仪器和设备，不适用于普通实验室。

近年来非同位素标记法得到很大发展，如酶促标记法（如生物素、地高辛标记法）和化学标记法（如荧光生物素、酶标记法）。非同位素标记的探针保存时间较长、避免了同位素的污染，但不及同位素标记探针敏感。

原理

DNA 酶切产物经琼脂糖凝胶电泳后，由于酶切片段长度接近而在凝胶上呈现出连续的谱带，无法分析 DNA 片段的变化情况,因此必须使用特异的标记探针来对转移到尼龙膜上的 DNA 进行杂交检测。

应用

在 RFLP 分析研究中,用 ³²P 标记探针是一种通用的方法,然而 ³²P 保存时间有限，同时需要特殊的防护装置、废液处理装置,因此限制了它的使用，目前在许多实验中已改用非同位素标记替代 ³²P。

来源：《遗传学实验教程》

操作方法

DNA 探针的非同位素标记技术

1.在一加有1mL LB-抗生素培养基的5mL溶血管中接种一单菌落,松松地盖上管帽,37℃剧烈振荡培养过夜。2.取800μL菌液至一1.5mLEppendorf管中。台式离心机12000r/min离心30s。余下的菌液于4℃保存或加入40μL灭菌甘油混匀于-80℃保存。3.弃上清液。用400μL 1%TritonX-100剧烈振荡重悬菌体沉淀。4.菌体悬浮液煮沸5min后于冰上放置5min。细菌裂