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树突状细胞表型和功能检测
树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前公认的体内功能最强大的专职抗原提呈细胞(professional antigen presenting cell,APC), 在免疫应答的首要环节--抗原提呈过程中扮演着重要的角色,是唯一能够活化初始 Th 细胞的 APC,成为适应性免疫应答的始动者;同时,DC 也在诱导机体的免疫耐受中发挥重要作用。在免疫稳定状态下,分布于外周非淋巴组织的 D
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人血性单核巨噬细胞的诱导及分离
巨噬细胞(macrophages,MΦ)是由血液中单核细胞迁入组织后分化形成的成熟类细胞,广泛分布于脾脏、肝脏、腹腔、神经系统以及结缔组织等,具有吞噬杀伤、抗原提呈及免疫调节作用。近年的研究发现巨噬细胞在不同微环境中可以发生不同性质的活化,成为具有不同表面分子和功能特征的亚群。根据其不同的表型特点和功能特点及对 Th1/Th2 应答的诱导,通常将其分为两种类型:经典活化的巨噬细胞(classica
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人外周血树突状细胞的分离
树突状细胞(dendritic cell,DC)是一种贴壁细胞,它在脾脏贴壁细胞中所占的比例小于 1%,细胞轮廓不规则,具有树枝状的突起。DC 不但存在于脾脏等外周淋巴器官中,也存在于外周血中。为了在体外研究 DC 的功能,需要对体内的 DC 细胞(主要是外周血、脾脏、淋巴结)进行分离、纯化。分离纯化 DC 的方法主要有两种:基于细胞物理性状的分离方法(如贴壁法)和基于细胞表面标记的分离方法(如
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人蜕膜免疫细胞的分离及纯化
蜕膜免疫细胞群是母胎免疫耐受的生物学基础,其构成极为特殊,主要由特殊类型的 NK 细胞(CD56 hrighCD16-)(~70%)、T 细胞(~10%)和单核巨噬细胞(~15%)等组成,它们通过表达特殊活化标志和产生大量的细胞因子,在母胎界面局部发挥着不同于外周的免疫调节作用,形成 Th2 亚群免疫优势,并通过旁分泌作用调控滋养细胞的生长、分化和迁移,从而对妊娠的维持起重要的局部调节作用。
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细胞毒性T细胞表位的鉴定
细胞毒性 T 细胞表位的鉴定方法主要包括两种,一种是先获得抗原特异性 CTL 细胞克隆,再分别将蛋白质抗原的系列多肽片段与相应细胞(如 TAP 缺陷的人源性 T2 细胞、鼠源性 RMA-S 细胞等)一起孵育后用作靶细胞,通过检测 CTL 细胞克隆对靶细胞的细胞毒活性,鉴定出 CTL 表位。抗原特异性 CTL 细胞克隆可以从肿瘤浸润淋巴细胞、淋巴结细胞或荷瘤机体外周血单个核细胞(PBMC)、病毒感染
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MHC分型实验
MHC 分型是指通过对外周血、细胞或机体中 MHC 进行分析,以辅助进行 T 细胞表位鉴定。
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蛋白芯片技术
蛋白芯片技术,也称蛋白质微阵列(protein microarray),是一种高通量的蛋白分析技术,不仅可以在蛋白质水平上检测基因的表达,用于蛋白质表达谱研究;还可以大规模研究抗原-抗体及其他各种蛋白质-蛋白质的相互作用,以及DNA-蛋白质、RNA-蛋白质的相互作用。目前,用于蛋白芯片技术的方法主要有1种:主要包括芯片制作、样品准备、生物化学反应、检测分析的步骤。
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Th细胞表位的鉴定
Th 细胞表位的鉴定方法主要包括两种,一种是先从患病机体(如肿瘤、病毒感染等)或抗原免疫后机体获得肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)淋巴结细胞或 PBMC。体外用抗原刺激后,进行有限稀释,或分离出 CD4+T 细胞,进行有限稀释。然后再用 γ 射线照射后或丝裂霉素 C 处理后的与相应抗原或其片段孵育过的 PBMC、EB 病毒(EBV)转化后 B 细胞、DC 等作为 APC,用于刺激细胞,获得 CD4T 细
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组织和细胞内miRNA丰度的检测实验
miRNA是长度为20-23个核苷酸的单链小分子RNA,在真核生物由RNA聚合酶II催化、以基因组DNA为模板转录产生,但不翻译为蛋白质。miRNA在进化上保守,并广泛存在于动物、植物、真菌及病毒基因组中。目前,用于组织和细胞内miRNA丰度的检测实验的方法主要有5种:Northern印迹测定组织和细胞内miRNA丰度、实时定量PCR测定组织和细胞内miRNA丰度、微阵列芯片测定组织和细胞内miR
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T淋巴细胞亚群染色技术
T 淋巴细胞亚群染色技术是指利用荧光素标记的抗体作为荧光染料,对细胞膜表面分子或固定破膜后对胞内细胞因子进行标记,然后利用流式细胞仪进行定性定量分析,并可进一步对细胞的种类及功能进行分析研究。
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长链非编码RNA的研究策略及技术
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是指长度大于200个核苷酸但不编码蛋白质的RNA转录本。lncRNA种类众多,研究表明,小鼠的转录组中共包含大约18万种转录本,其中具有蛋白编码能力的转录本仅有2万余种,而在剩下的16万种中,除了少部分是小RNA之外,绝大多数都是lncRNA。长链非编码RNA可通过多种机制发挥广泛而重要的生物学功能,比如影响基因转录、引起染色
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CFSE检测人外周血T细胞体外扩增
CFSE 检测人外周血 T 细胞体外扩增的是指利用 CFSE 对活细胞进行荧光标记,从而用于检测细胞增殖,细胞周期的估算及细胞分裂等方面,这里仅介绍 CFSE 检测人外周血 CD4+ T,CD8+ T 和 γδ+ T 细胞体外扩增技术。
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细胞膜表面分子免疫标记
细胞膜表面分子免疫标记方法,是利用荧光素标记的抗体作为荧光染料,对细胞膜表面分子进行标记,然后利用流式细胞仪进行定性定量分析,并可进一步对细胞的种类及功能进行分析研究。目前,用于细胞膜表面分子免疫标记的方法主要有 5 种:直接免疫荧光染色法、间接免疫荧光染色法、直接荧光标记与间接荧光标记混合染色法、全血免疫荧光染色法和流式细胞多标记分析的荧光补偿。
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外源基因在真核细胞中的表达
原核表达系统由千产物不能正确折叠以及缺乏翻译后修饰(二硫键配对、信号肽切除、糖基化、磷酸化等)等原因,往往导致表达产物不表现其相应的生物学活性。因此,在进行真核基因(特别是人类基因)表达时,真核细胞表达系统应该是首要的选择,尤其是对于功能性膜蛋白、需要翻译后修饰的蛋白质、分泌型蛋白质和蛋白质复合物中的亚基组分等,因为这些蛋白质往往只有在真核细胞表达系统中才能获得有完全生物学活性的表达产物。目前,常
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免疫细胞化学技术-细胞样本的制备
免疫细胞化学技术-细胞样本的制备,是免疫细胞化学技术。目前,用于免疫细胞化学细胞样本的制备的方法主要有 2 种:贴壁细胞(爬片法、培养皿制备)和悬浮细胞(甩片法、粘附法)制备。
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免疫细胞化学技术-细胞固定
免疫细胞化学技术-细胞固定,是免疫细胞化学技术步骤之一。目前,用于免疫细胞化学技术-细胞固定的方法主要有 3 种:贴壁细胞的固定-脱水法、贴壁细胞多聚甲醛交联法和悬浮细胞多聚甲醛的固定。
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免疫细胞化学的衍生技术
免疫细胞化学的衍生技术,是免疫细胞化学技术的原理,衍生出各种研究抗原表达特性的方法。目前,用于免疫细胞化学的衍生技术的方法主要有2种:免疫酶染色卵白素-生物素-酶复合物染色法和免疫酶染色碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色法。
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免疫细胞吞噬功能测定
机体内具有吞噬(phagocytosis)功能的细胞称为吞噬细胞,主要包括单核巨噬细胞和中性粒细胞两大类。吞噬细胞吞噬、消化、清除侵人人体的细菌等异物以及人体产生的衰老、损伤、癌变细胞和坏死组织等,是机体固有免疫的重要组成部分。免疫细胞吞噬功能测定主要包括巨噬细胞吞噬功能测定和中性粒细胞吞噬功能测定。
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细胞毒实验技术
细胞毒实验技术,是检测免疫细胞或分子对靶细胞杀伤能力的实验。目前,用于细胞毒实验技术的方法主要有 2 种:补体依赖细胞毒性实验和细胞毒性 T 细胞功能测定。
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抗体效价测定实验
抗体效价测定实验是用于检测免疫血清效价高低。目前用于测定抗体效价的方法主要有3种:试管凝集反应、琼脂扩散实验和酶联免疫吸附实验(ELISA)。
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