免疫学实验

Th 细胞表位的鉴定方法主要包括两种，一种是先从患病机体（如肿瘤、病毒感染等）或抗原免疫后机体获得肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）淋巴结细胞或 PBMC。体外用抗原刺激后，进行有限稀释，或分离出 CD4+T 细胞，进行有限稀释。然后再用 γ 射线照射后或丝裂霉素 C 处理后的与相应抗原或其片段孵育过的 PBMC、EB 病毒（EBV）转化后 B 细胞、DC 等作为 APC，用于刺激细胞，获得 CD4T 细

miRNA是长度为20-23个核苷酸的单链小分子RNA，在真核生物由RNA聚合酶II催化、以基因组DNA为模板转录产生，但不翻译为蛋白质。miRNA在进化上保守，并广泛存在于动物、植物、真菌及病毒基因组中。目前，用于组织和细胞内miRNA丰度的检测实验的方法主要有5种：Northern印迹测定组织和细胞内miRNA丰度、实时定量PCR测定组织和细胞内miRNA丰度、微阵列芯片测定组织和细胞内miR

T 淋巴细胞亚群染色技术是指利用荧光素标记的抗体作为荧光染料，对细胞膜表面分子或固定破膜后对胞内细胞因子进行标记，然后利用流式细胞仪进行定性定量分析，并可进一步对细胞的种类及功能进行分析研究。

长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是指长度大于200个核苷酸但不编码蛋白质的RNA转录本。lncRNA种类众多，研究表明，小鼠的转录组中共包含大约18万种转录本，其中具有蛋白编码能力的转录本仅有2万余种，而在剩下的16万种中，除了少部分是小RNA之外，绝大多数都是lncRNA。长链非编码RNA可通过多种机制发挥广泛而重要的生物学功能，比如影响基因转录、引起染色

CFSE 检测人外周血 T 细胞体外扩增的是指利用 CFSE 对活细胞进行荧光标记，从而用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面，这里仅介绍 CFSE 检测人外周血 CD4+ T，CD8+ T 和 γδ+ T 细胞体外扩增技术。

细胞膜表面分子免疫标记方法，是利用荧光素标记的抗体作为荧光染料，对细胞膜表面分子进行标记，然后利用流式细胞仪进行定性定量分析，并可进一步对细胞的种类及功能进行分析研究。目前，用于细胞膜表面分子免疫标记的方法主要有 5 种：直接免疫荧光染色法、间接免疫荧光染色法、直接荧光标记与间接荧光标记混合染色法、全血免疫荧光染色法和流式细胞多标记分析的荧光补偿。

原核表达系统由千产物不能正确折叠以及缺乏翻译后修饰（二硫键配对、信号肽切除、糖基化、磷酸化等）等原因，往往导致表达产物不表现其相应的生物学活性。因此，在进行真核基因（特别是人类基因）表达时，真核细胞表达系统应该是首要的选择，尤其是对于功能性膜蛋白、需要翻译后修饰的蛋白质、分泌型蛋白质和蛋白质复合物中的亚基组分等，因为这些蛋白质往往只有在真核细胞表达系统中才能获得有完全生物学活性的表达产物。目前，常

免疫细胞化学技术-细胞样本的制备，是免疫细胞化学技术。目前，用于免疫细胞化学细胞样本的制备的方法主要有 2 种：贴壁细胞（爬片法、培养皿制备）和悬浮细胞（甩片法、粘附法）制备。

免疫细胞化学技术-细胞固定，是免疫细胞化学技术步骤之一。目前，用于免疫细胞化学技术-细胞固定的方法主要有 3 种：贴壁细胞的固定-脱水法、贴壁细胞多聚甲醛交联法和悬浮细胞多聚甲醛的固定。

免疫细胞化学的衍生技术，是免疫细胞化学技术的原理，衍生出各种研究抗原表达特性的方法。目前，用于免疫细胞化学的衍生技术的方法主要有2种：免疫酶染色卵白素-生物素-酶复合物染色法和免疫酶染色碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色法。

机体内具有吞噬（phagocytosis）功能的细胞称为吞噬细胞，主要包括单核巨噬细胞和中性粒细胞两大类。吞噬细胞吞噬、消化、清除侵人人体的细菌等异物以及人体产生的衰老、损伤、癌变细胞和坏死组织等，是机体固有免疫的重要组成部分。免疫细胞吞噬功能测定主要包括巨噬细胞吞噬功能测定和中性粒细胞吞噬功能测定。

细胞因子 (cytokine) 是由细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白物质的统称。在免疫应答过程中，细胞因子在免疫调节、炎症应答、肿瘤转移等生理和病理过程中起重要作用。细胞因子及受体检测是判断机体免疫功能的一个重要指标，具有重要的实验研究价值和临床实用价值，可以作为许多疾病辅助诊断依据或用于病程观察、疗效判断等。目前，用于细胞因子的检测方法主要以下几种：酶联免疫吸附实验 (ELISA) 细胞因子的

细胞毒实验技术，是检测免疫细胞或分子对靶细胞杀伤能力的实验。目前，用于细胞毒实验技术的方法主要有 2 种：补体依赖细胞毒性实验和细胞毒性 T 细胞功能测定。

抗体效价测定实验是用于检测免疫血清效价高低。目前用于测定抗体效价的方法主要有3种：试管凝集反应、琼脂扩散实验和酶联免疫吸附实验（ELISA）。

单克隆抗体鉴定实验鉴定指标有些与多克隆抗体的相同, 所采用方法可通用; 但有些指标的鉴定则具有 McAb 的特殊性.目前, 单克隆抗体鉴定实验主要有 7 种: 抗体效价鉴定实验、抗体特异性鉴定、McAb 的 Ig 类、亚类及型的鉴定实验、杂交瘤细胞的染色体分析、McAb 中和活性的鉴定实验、McAb 识别抗原表位的鉴定实验和 McAb 亲和力的鉴定实验.

化学发光（chemiluminescence，CL）是指伴随化学反应过程所产生的光辐射现象，大多数化学发光是以 O2 和 H2O2 作为氧化剂的氧化反应发光。化学发光反应包括两个关键步骤，即化学激发和发光，化学激发需提供足够的化学能，激发化学发光剂在吸收能量后跃迁至电子激发态，而当返回较低能级基态时有足够的发光量子产率。目前，用于化学发光免疫分析实验的方法主要有 3 种：化学发光酶免疫分析、化学发

抗核抗体（antinuclear antibody，ANA）是针对细胞核成分的自身抗体，没有器官和种系特异性，ANA 阳性提示患有 SLE 或风湿病等自身免疫性疾病。免疫荧光（immunofluorescence）标记技术，是基于免疫学抗原-抗体特异性反应原理，应用荧光素标记抗原或抗体，检测目的抗原或抗体的方法，常用于组织或细胞抗原或抗体检测，也可用于液相抗原或抗体检测，如免疫荧光抗体技术、流式细

胶体金作为免疫标记物始于 1971 年，Faulk 和 Taylor 将兔抗沙门菌抗血清与胶体金颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的表面抗原。1974 年 Romano 将胶体金标记在马抗人 IgG 上，建立了间接免疫金染色法。1981 年 Danscher 确立了免疫金银染色法。层析法检测试剂最早出现于 1988 年，是 Unipath 公司利用染料颗粒开发生产的一种非常方便使用的妊娠检

B 细胞表面有许多膜分子，包括细胞表面分化抗原和模型免疫球蛋白（smlg），在分化的不同阶段和不同的定居位置，B 细胞表达的表面分子不尽相同，因此可以根据表面分子的不同来判断 B 细胞分化的阶段和功能状态。

B 淋巴细胞来源于哺乳动物骨髓和鸟类法氏囊，简称 B 细胞。B 细胞在骨髓经历骨髓干细胞、淋巴样祖细胞和前 B 细胞的分化过程，迁入到外周免疫器官，逐步分化发育为成熟 B 细胞。B 淋巴细胞的分离是利用 B 细胞多种生物学特性，如 B 细胞表达 CD19、CD20 分子，具有膜免疫球蛋白等，可将 B 细胞与其他细胞进行分离。B 淋巴细胞的分离常用方法有尼龙棉柱法、T 细胞清除法、免疫磁珠法、流式细