人外周血树突状细胞的分离

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

树突状细胞（dendritic cell，DC）是一种贴壁细胞，它在脾脏贴壁细胞中所占的比例小于 1%，细胞轮廓不规则，具有树枝状的突起。DC 不但存在于脾脏等外周淋巴器官中，也存在于外周血中。为了在体外研究 DC 的功能，需要对体内的 DC 细胞（主要是外周血、脾脏、淋巴结）进行分离、纯化。分离纯化 DC 的方法主要有两种：基于细胞物理性状的分离方法（如贴壁法）和基于细胞表面标记的分离方法（如 MACS 和 FACS 分离法）。

原理

贴壁法人外周血树突状细胞的分离的基本原理是 DC 具有轻度黏附特性。在经过分离液处理培养一定时间（24 小时内）就自动从塑料平皿上脱落下来，而单核细胞和巨噬细胞可长时间黏附，借此可分离出 DC。

MACS 法人外周血树突状细胞的分离的基本原理是根据人树突状细胞表面表达的相对特异性表面标志，将包被了磁珠的抗体与淋巴组织、血液或非淋巴组织细胞悬液共孵育并置于磁场后，结合了相应抗体的细胞将留在分选柱中，脱离磁场后可分离得到相应的 DC。不同组织来源的人源 DC 具有不同的特征。例如，CD141（BDCA-3）表达于人外周血中占很小一部分的 CD11^cimCD123 CD1^c（BDCA-1）CD4＋髓系 DC（约占所有外周血单个核细胞的 0.04%），而 CD1c（BDCA-1）则可用于分选人外周血中占绝大部分的 CD11^chighCD123^low 髓系 DC（约占所有外周血单个核细胞的 0.6%）。

另外 DC-SIGN 则用于分离分布于皮肤、黏膜，以及淋巴组织包括扁桃体、淋巴结、脾脏等处的 DC。DC-SIGN 也表达于单核细胞来源的 DC，但不表达于外周血 DC 亚群。因此，可根据实验需要选择合适的分选方式。这里介绍两步法分离外周血中成熟的 DC（其主要特征是高表达 CD83）。

来源：丁香实验团队

操作方法

人外周血树突状细胞贴壁法分离纯化

人外周血树突状细胞 MACS 法分离