丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

养的DC细胞不贴壁,还有cd14+?

相关实验:人外周血树突状细胞的分离

user-title

cirong

以前养都正常的,现在整个实验室的的DC贴壁都奇奇怪怪的,用的DMEM+FBS,贴壁4h,当天洗完看着贴壁状态挺好的,第二天去看就飘起来了。

FACS发现CD11c+CD14+,不知道哪里出了问题😭最后第七天收的时候还是有些是贴壁状态,还是双阳

wx-share
分享

3 个回答

user-title

bamboopiggy

有帮助

在第0天,对来源于一个白细胞单采术样本的细胞进 行铺板,挑选贴壁2小时的单核细胞。将没有贴壁的 细胞冲洗掉,贴壁的细胞在培养基中培养7天。在第5 天,将成熟化添加物分别加入到细胞(成熟的树突状 细胞)或者不加入到细胞(未成熟的树突状细胞)中 培养两天。通过流式细胞仪来测定未成熟及成熟的 树突状细胞中CD80、CD83和CD86的表达。在第7 天,细胞表达了成熟的树突状细胞标志物CD80、 CD83和CD86

user-title

cirong

有帮助

是原代细胞,所以不会有细胞老化问题。第七天收DC之前没有用胰酶消化过。密度也OK的,不高

培养基碱性的话不确定,我等会可以去看看,大概差多少会出现不贴壁的情况呢?用的是过期的DMEM。

user-title

天一湖医者

有帮助

不贴壁原因,胰蛋白酶消化过度;支原体污染;培养基pH值过碱(NaHCO3分解);细胞老化;接种细胞起始浓度太低或太高。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序