养的DC细胞不贴壁，还有cd14+？
cirong
以前养都正常的，现在整个实验室的的DC贴壁都奇奇怪怪的，用的DMEM+FBS，贴壁4h，当天洗完看着贴壁状态挺好的，第二天去看就飘起来了。
FACS发现CD11c+CD14+，不知道哪里出了问题😭最后第七天收的时候还是有些是贴壁状态，还是双阳
3 个回答
bamboopiggy
在第0天，对来源于一个白细胞单采术样本的细胞进 行铺板，挑选贴壁2小时的单核细胞。将没有贴壁的 细胞冲洗掉，贴壁的细胞在培养基中培养7天。在第5 天，将成熟化添加物分别加入到细胞（成熟的树突状 细胞）或者不加入到细胞（未成熟的树突状细胞）中 培养两天。通过流式细胞仪来测定未成熟及成熟的 树突状细胞中CD80、CD83和CD86的表达。在第7 天，细胞表达了成熟的树突状细胞标志物CD80、 CD83和CD86
cirong
是原代细胞，所以不会有细胞老化问题。第七天收DC之前没有用胰酶消化过。密度也OK的，不高
培养基碱性的话不确定，我等会可以去看看，大概差多少会出现不贴壁的情况呢？用的是过期的DMEM。
天一湖医者
不贴壁原因，胰蛋白酶消化过度；支原体污染；培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；细胞老化；接种细胞起始浓度太低或太高。
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