消化后不贴壁的问题

丁香园网友doctorfri的问题为：

我的细胞消化完后不贴壁,请教各位何原因.

目前已基本排除以下原因:

1、培养基和血清

2、培养瓶及装培养基和血清的瓶

3、操作的问题

4、胰酶及消化时间的问题

丁香园网友gkxmj的观点为：

1、消化过度，用酶消化时，见细胞开始变圆时既终止消化，用吸管轻轻吹打即可，消化过度，24小时后可见细胞成簇，形态不规则。

2、培养瓶 新的培养瓶，细胞不易贴壁，建议加多聚赖氨酸处理。

3、细胞传代次数过多。

4、细胞传代24小时之内，最好不要动他，晃来晃去，影响贴壁。

丁香园网友soso_fan的观点为：

1、胰酶的浓度或者温度过高，细胞已经损伤或死亡。还有就是消化过后的中止要完全，我觉得一般用10％的1640已经可以了。

2、尽量用一次性的塑料瓶，对于原代培养的细胞我觉得用一次性培养瓶还是值得的。

3、不要过于剧烈的摇晃和吹打细胞。

4、可以适当的提高牛血清和生长因子的浓度。

5、有很多细胞本身只能原代培养或者传一两代，比如脐静脉内皮细胞和角质细胞都是只能传一两代就不行了。