细胞消化后成团分散不开的问题

丁香园网友zyz00的问题为：

我刚买了一瓶MCF-7细胞，用胰酶消化了10分钟，吹打了几百下，细胞还是没分散开，传代后贴壁也不是太好，怎么办那？。

丁香园网友huananhu的观点为：

我没有养过这种细胞，但是我养过鼻咽癌细胞。这种细胞的贴壁能力很强，用0.5%胰酶（含0.1%EDTA）一般要消化12~15min。

我的经验是细胞用PBS洗涤时要洗净残余的培养基，加入胰酶后在培养箱中消化（避免细胞室温下受损以及在此温度时胰酶活性最强）至细胞收缩变圆（可显微镜下观察）且有少许细胞脱落（有流下来的趋势），随后立即弃去胰酶（如果脱落的细胞很多且需要大量细胞实验，则不能弃去胰酶），加入培养基仔细吹打（不能用无血清培养基或者PBS替代，否则细胞聚集成团块或絮状）。一般我都离心一次弃去上清（去除残留的胰酶及漂浮的死细胞或细胞碎片）。

丁香园网友windboy77的观点为：

1、如上所说，你要知道胰酶的浓度，浓度如果太低，光消化10分钟是根本不够的，像你这样的消化方法，至少要0.25％的浓度，可这么高的浓度，如果消化时间长了对于细胞本身也造成很大的损坏，肯定贴壁效果不好。

2、给你点建议，可以适当降低胰酶的浓度，然后在CO2孵箱中37度多消化一段时间，然后再吹打均匀，可能会有一定的效果，这样对细胞也有保护作用，但是时间最好不要超过30分钟，浓度大约在0.15％左右，我过去消化贴壁的心肌细胞，来测量细胞体积，就是用的这种方法，感觉效果还可以。

丁香园网友zxcong的问题为：

我细胞在传代消化后很容易成团，而且吹打也没有什么特别作用，这是什么原因呢？该如何去防止呢？

丁香园网友bingxue324的观点为：

消化液里加入edta可以减少细胞成团的现象，血清可以终止胰酶的作用，如果是进口血清的话也能终止edta的作用。用胰酶消化后胰酶可以倒掉，也可以不倒，直接加血清终止，如果消化液中加入了edta的话，就要将消化液倒干净，如果细胞贴壁要求不是很严格的话，一般不需要进行离心。

丁香园网友goodayellen的观点为：

我也是刚做细胞培养不久，用的胰酶是0。05％胰酶＋0。02％EDTA，开始是消化细胞总是成团（计数严重不准）。现在消化基本都是单细胞悬液了，总结了一下经验：1，细胞千万不能长太满，80－90％就好（细胞刚刚基本成单层细胞，没有出现成层生长）2 用pbs洗两遍，加入消化液，镜下看出现细胞回缩，倒掉消化液（放置一会儿，用残留的胰酶消化）待细胞边圆，吹打就好了，基本不用使劲吹就都下来了。3消化过程中最好不要使劲摇动培养瓶，这样细胞特别容易成屑样脱落。