靶细胞杀伤实验：Cr51法

【材料】Na2 51 CrO 4，效应细胞；靶细胞；

（以CTL杀伤肿瘤细胞为例）： 1、效应细胞 将分离的外周血T细胞, 培养7d后按照DC:T = 1:10的比例分别加入自身细胞致敏DC,细胞系致敏DC及未致敏DC, 继续培养3-4d后收集T细胞, 此即为效应细胞CTL. 2、靶细胞 分别收集1×106 Panc1以及从6例肿瘤组织中分离获得的胰腺癌细胞(编号S1-S6), 重悬于0.5mL不含碳酸氢钠的完全培养液. 加入3.7 MBq 51Cr铬酸钠, 37℃水浴中标记1 h, 洗涤细胞三次, 调整细胞浓度为5×104/mL. 3、细胞毒效应 向96孔板加入靶细胞, 每孔100 μL. 按效应细胞:靶细胞= 50:1的比例向各孔加入100 μL不同效应细胞. 每组均设3个复孔, 阴性对照孔(自发释放)只加100 μL完全培养液, 阳性对照孔(最大释放)加100 μL 1% NP40 (v/v). 将96孔板置37℃培养4 h后, 1000 g离心培养板10 min, 每孔吸取100 μL上清在液闪计数仪上测定每分钟放射活性(cpm值).

细胞杀伤活性按以下公式计算: CTL活性(%) = [(实验组cpm-自发释放cpm)/(最大释放cpm-自发释放cpm)]×100%. 统计学处理采用SPSS统计软件, 所有变量均以mean±SD表示. 变量间差异显著性比较用方差分析(Student-Newman-Keuls法).