靶细胞杀伤实验：LDH法

互联网2008-07-28

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一、效应细胞的制备

激惹5天后，于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结，100目钢网研磨，调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。

二、靶细胞的制备

P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养，调整细胞浓度为2×105/ml或3.33×105/ml（加入α-Lyt2 mAb时的靶细胞浓度），台盼蓝染色成活率>95%。

三、LDH释放法测定CTL的功能

按表1加样于96孔培养板中，设3个复孔。混匀置二氧化碳培养箱中孵育4h。室温离心，用微量加样器每孔取上清液100μl，送全自动生化分析仪测定每孔的LDH含量。

表1　LDH释放法测定CTL活性的加样情况（μl）

注：靶细胞浓度为3.33×105/ml

四、计算CTL活性

特异杀伤率(%)=(实验孔LDH值-自然释放孔LDH值)/(最大释放孔LDH值-自然释放LDH值)

五、统计学处理

DTH的测定，4组间比较采用方差分析，两组比较采用q检验。对于CTL的特异杀伤率，先进行百分数的平方根反正弦转换后采用方差分析进行4组间比较，两两比较采用q检验。