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细胞毒实验技术

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

细胞毒实验技术,是检测免疫细胞或分子对靶细胞杀伤能力的实验。目前,用于细胞毒实验技术的方法主要有 2 种:补体依赖细胞毒性实验和细胞毒性 T 细胞功能测定。

原理

根据实验方法不同,对应的原理也有所不同:

补体依赖细胞毒实验的基本原理是细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3 或 IgM)结合激活补体活化的经典途径,补体活化产生的攻膜复合体可引起细胞膜损伤,损伤细胞膜通透性改变,而使细胞外低渗的液体进入细胞,导致细胞肿胀死亡,可以通过显微镜计数死细胞的多少,来判断补体依赖的细胞毒活性。

细胞毒性 T 细胞功能测定的基本原理是细胞毒性 T 细胞(CTL)是特异性细胞免疫的主要效应细胞之一,一般指 CD8+T 细胞,可特异而高效地杀伤靶细胞,参与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫和移植排斥反应。它对靶细胞的杀伤首先基于对靶细胞表面特异性抗原的识别,CTL 可以通过其 TCR 识别靶细胞表面的抗原肽-MHC 复合物,其中抗原肽可来自肿瘤抗原、病毒抗原或自身抗原。


识别后,CTL 通过脱颗粒和直接接触杀伤靶细胞,外周血淋巴细胞包含针对不同抗原的特异性 CTL 克隆,在体外经某一特定(或同种异体细胞)抗原刺激后,能识别该抗原的 T 细胞克隆被选择性激活、增殖,而其他 T 细胞克隆则逐渐死亡;经 3-4 次刺激后,存活的细胞为识别 MHC-特异性抗原肽复合物的细胞即抗原特异性 CTL。细胞毒性 T 细胞对靶细胞杀伤的机制是通过释放的穿孔素-颗粒酶系统介导的溶靶细胞作用或通过 Fas/FasL 系统介导的细胞凋亡作用。

来源:丁香实验团队

操作方法

补体依赖细胞毒实验

补体依赖细胞毒实验,是用来判断补体依赖的细胞毒活性。

细胞毒性 T 细胞功能测定

细胞毒性 T 细胞功能测定,细胞毒性 T 细胞(CTL)是特异性细胞免疫的主要效应细胞之一,一般指 CD8+T 细胞,CTL 作用的最显著特点是具有高度的特异性,根据抗原肽-MHC 复合物的组成特异性进行 CTL 功能检测。

LDH 法检测人外周血 CTL 细胞杀伤活性

LDH 法检测人外周血 CTL 细胞杀伤活性,常用来测得 NK 细胞的杀伤活性。

51Cr 释放法检测人抗原特异性细胞毒性 T 细胞功能

51Cr 释放法检测人抗原特异性细胞毒性 T 细胞功能,是进行 CTL 对靶细胞直接杀伤效应的检测方法。

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