细胞毒实验技术

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

细胞毒实验技术，是检测免疫细胞或分子对靶细胞杀伤能力的实验。目前，用于细胞毒实验技术的方法主要有 2 种：补体依赖细胞毒性实验和细胞毒性 T 细胞功能测定。

原理

根据实验方法不同，对应的原理也有所不同：

补体依赖细胞毒实验的基本原理是细胞性抗原与特异性抗体（IgG1,2,3 或 IgM）结合激活补体活化的经典途径，补体活化产生的攻膜复合体可引起细胞膜损伤，损伤细胞膜通透性改变，而使细胞外低渗的液体进入细胞，导致细胞肿胀死亡，可以通过显微镜计数死细胞的多少，来判断补体依赖的细胞毒活性。

细胞毒性 T 细胞功能测定的基本原理是细胞毒性 T 细胞（CTL）是特异性细胞免疫的主要效应细胞之一，一般指 CD8＋T 细胞，可特异而高效地杀伤靶细胞，参与抗病毒免疫、抗肿瘤免疫和移植排斥反应。它对靶细胞的杀伤首先基于对靶细胞表面特异性抗原的识别，CTL 可以通过其 TCR 识别靶细胞表面的抗原肽-MHC 复合物，其中抗原肽可来自肿瘤抗原、病毒抗原或自身抗原。

识别后，CTL 通过脱颗粒和直接接触杀伤靶细胞，外周血淋巴细胞包含针对不同抗原的特异性 CTL 克隆，在体外经某一特定（或同种异体细胞）抗原刺激后，能识别该抗原的 T 细胞克隆被选择性激活、增殖，而其他 T 细胞克隆则逐渐死亡；经 3-4 次刺激后，存活的细胞为识别 MHC-特异性抗原肽复合物的细胞即抗原特异性 CTL。细胞毒性 T 细胞对靶细胞杀伤的机制是通过释放的穿孔素-颗粒酶系统介导的溶靶细胞作用或通过 Fas/FasL 系统介导的细胞凋亡作用。

来源：丁香实验团队

操作方法

补体依赖细胞毒实验

补体依赖细胞毒实验，是用来判断补体依赖的细胞毒活性。

细胞毒性 T 细胞功能测定

细胞毒性 T 细胞功能测定，细胞毒性 T 细胞（CTL）是特异性细胞免疫的主要效应细胞之一，一般指 CD8＋T 细胞，CTL 作用的最显著特点是具有高度的特异性，根据抗原肽-MHC 复合物的组成特异性进行 CTL 功能检测。

LDH 法检测人外周血 CTL 细胞杀伤活性

LDH 法检测人外周血 CTL 细胞杀伤活性，常用来测得 NK 细胞的杀伤活性。

51Cr 释放法检测人抗原特异性细胞毒性 T 细胞功能

51Cr 释放法检测人抗原特异性细胞毒性 T 细胞功能，是进行 CTL 对靶细胞直接杀伤效应的检测方法。