细胞膜表面分子免疫标记

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

细胞膜表面分子免疫标记方法，是利用荧光素标记的抗体作为荧光染料，对细胞膜表面分子进行标记，然后利用流式细胞仪进行定性定量分析，并可进一步对细胞的种类及功能进行分析研究。目前，用于细胞膜表面分子免疫标记的方法主要有 5 种：直接免疫荧光染色法、间接免疫荧光染色法、直接荧光标记与间接荧光标记混合染色法、全血免疫荧光染色法和流式细胞多标记分析的荧光补偿。

原理

细胞膜表面分子免疫标记方法的基本原理是利用荧光素标记的抗体作为荧光染料，对细胞膜表面分子进行标记，然后利用流式细胞仪进行定性定量分析，并可进一步对细胞的种类及功能进行分析研究。

来源：丁香实验团队

操作方法

直接免疫荧光染色法标记细胞膜表面分子

直接免疫荧光染色法是荧光染色最简单、最基本的方法。

间接免疫荧光染色法标记细胞膜表面分子

间接免疫荧光染色法是先用已知未标记的一抗与待检测的抗原反应。反应一定时间后，洗去未结合的抗体，再与荧光素标记的二抗反应。根据所测定的荧光强度和阳性百分率可以得到相应抗原的密度和分布的比例。

直接荧光标记与间接荧光标记混合染色法标记细胞膜表面分子

混合荧光染色法是指在实验中，遇到两种或两种以上的抗原，同时运用直接标记的荧光抗体和间接标记的荧光抗体染色的方法。

全血免疫荧光染色法标记细胞膜表面分子

全血免疫荧光染色法，是指在检测血液样品时，血液样品不同于细胞，一般需要对全血进行裂解红细胞处理。标记方法常使用直接标记染色法。

流式细胞多标记分析的荧光补偿法标记细胞膜表面分子

流式细胞多标记分析的荧光补偿是指在进行流式细胞术多色分析时，待测细胞通常携带两种或两种以上的荧光素，如异硫氤荧光素（FITC）、藻红蛋白（PE）、别藻红蛋白（PECY5）等。这些荧光素被激光激发后发出不同波长的荧光，理论上每一种荧光通过选择恰当的滤光片可被相应的检测器检测到，而不受其他荧光的干扰。但实际上这些荧光染料都具有宽发射谱性质，尽管它们的发射峰各不相同，但发射光谱有很宽的范围。如果同时使用