简介
直接免疫荧光染色法是荧光染色最简单、最基本的方法。
原理
直接免疫荧光染色法的基本过程可分为如下几步：
(1) 取两支流式专用样品管分别标记为同型对照管和样品管。将 100 μl 细胞悬液加入流式专用样品管中 (细胞悬液浓度为 1×104 /μl)。
注意：为了保证实验结果可靠准确，实验中一定要制备同型对照管。若釆用多色荧光标记，注意荧光干扰，必要时要制备补偿管。
(2) 在同型对照管中加入荧光素标记同型对照抗体作为同型对照，在样品管中加入荧光素标记抗体作为待检样品，混匀 (试剂的用量根据试剂说明书)。
注意：
① 若样品制备好但不能马上检测，最好 4 ℃ 避光保存。
② 加入荧光素标记的抗体前，要用羊血清封闭待检测细胞表面的 Fc 受体。
(3) 4 ℃ 避光孵育 30 min，加入细胞洗液 2 ml，1000 r/min 离心 5 min，反复洗涤 2 次。
(4) 弃上清，加入固定液 500 μl，混匀。
(5) 上流式细胞仪检测与分析。
材料与仪器
器材：
流式细胞仪。
试剂：
① 荧光标记的特异性单克隆抗体及同型对照抗体 ;
② 细胞洗液。含 2% BSA、0.2% NaN3 的 PBS，固定液 (1% 多聚甲醛 PBS，pH7.2)。
耗材：
流式专用样品管、离心机、玻璃管
步骤
直接免疫荧光染色法的基本过程可分为如下几步：
(1) 取两支流式专用样品管分别标记为同型对照管和样品管。将 100 μl 细胞悬液加入流式专用样品管中 (细胞悬液浓度为 1×104 /μl)。
注意：为了保证实验结果可靠准确，实验中一定要制备同型对照管。若釆用多色荧光标记，注意荧光干扰，必要时要制备补偿管。
(2) 在同型对照管中加入荧光素标记同型对照抗体作为同型对照，在样品管中加入荧光素标记抗体作为待检样品，混匀 (试剂的用量根据试剂说明书)。
注意：
① 若样品制备好但不能马上检测，最好 4 ℃ 避光保存。
② 加入荧光素标记的抗体前，要用羊血清封闭待检测细胞表面的 Fc 受体。
(3) 4 ℃ 避光孵育 30 min，加入细胞洗液 2 ml，1000 r/min 离心 5 min，反复洗涤 2 次。
(4) 弃上清，加入固定液 500 μl，混匀。
(5) 上流式细胞仪检测与分析。
来源：丁香实验
