DNA 实验

来源：《分子细胞遗传技术与应用》

动物肝脏DNA提取可以：（1）用于法医学鉴定；（2）诊断和系统发育研究；（3）用于进一步的聚合酶链式反应（PCR）以获得DNA。

质粒DNA提取可以：（1）快速纯化质粒；（2）用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

对DNA进行甲基化检测

cDNA末端快速扩增

血基因组DNA提取可用于：（1）从冻全血、血浆、血清、骨髓、其他体液、淋巴细胞、培养细胞、病毒和线粒体中提取DNA；（2）用于后续测序、遗传信息学等研究。

构建荧光素酶质粒，然后转染至细胞中，通过比较过表达或者干扰miRNA后，检测报告基因表达的改变。

核酸提取作为分子实验中最基础的实验之一，几乎是所有实验的基本，无论后续的克隆、PCR、qPCR、建库测序等等都需要核酸才能顺利进行。

将质粒 DNA 导入细菌

从细菌中提纯质粒DNA

质粒作为低等生物体内的最小遗传单位，具有分子量小、复制速度快等诸多优点，质粒构建为生物工程提供工具载体。

来源：《分子细胞遗传学技术与应用》

来源：《分子细胞遗传学技术与应用》

模板 DNA 质量直接影响 PCR 结果，是 PCR 成功的关键之一。根据其检测对象（组织细胞材料）的不同，有不同的制备方法，常用的材料有石蜡切片、冰冻切片、血细胞、胸腹水等。来源《免疫组织化学实验技术及应用》

常用的核酸电泳法有两种。①水平电泳：琼脂糖凝胶，紫外光下判断条带。此法经济省时，但分辨率较低。②垂直电泳：聚丙烯酰胺凝胶，可见光下判断条带。此法相对费力，但分辨率较高。分辨率高是聚丙烯酰胺电泳法被优先用于克隆性基因重排条带判断的关键。在聚丙烯酰胺凝胶上较宽弥散被判断为假阳性（阴性）的条带，在琼脂糖胶上却往往由于其分辨性差而被判断为阳性条带。内容《免疫组织化学实验技术及应用》

本节介绍依赖于在哺乳动物细胞质合成噬菌体 T7 RNA 聚合酶的瞬时细胞质表达系统。首先，将感兴趣的基因插入质粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶启动子（PT7）的控制下。应用脂质体转染，重组质粒进入感染了 vTF7-3 的细胞质中，而 vTF7-3 是一种能编码噬菌体T7 RNA聚合酶的重组痘苗病毒（见「重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染」）。在培养过程中，外源基因被高效的 T7

为了克服用别的方法在哺乳动物细胞中诱导基因表达所遇到的困难，四环素调控的基因表达系统被发展出来。这些困难包括多向性的、非特异的作用；或诱导试剂、处理方法对细胞的毒性；高的非诱导表达背景等。本实验所描述的方法是用改造的含有转录激活因子的四环素调控系统，它能在培养的细胞和转基因小鼠（在某种程度上）中表达四环素和目的基因。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度离心的方法纯化。纯化的病毒可用于制备痘苗病毒 DNA ，用于不允许存在感染细胞蛋白污染的研究中，同时也可以用作高滴度的病毒储液。对于大规模的纯化（至少 1 L 的培养物），最好的方法是用 HeLa 细胞悬液作为感染的对象，而不要用单层培养的细胞。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

本实验介绍痘苗病毒感染细胞的方法和质粒转移载体转染感染后的细胞产生重组病毒的方法。内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

差减克隆是分离和鉴定两个细胞群中差异表达的 mRNA 的有效技术。相比较的细胞类型是［＋］（或 测 试）细胞和［-］（或驱动）细胞，在测试细胞中表达而不在驱动细胞中表达的 mRNA 将被分离出来。必需的差减次数主要取决于 cDNA 的多样性。多样性是指每一个细胞类型中不同的cDNA 或 cDNA 片段的总数（Davidson， 1986）。来源：《精编分子生物学实验指南（第五版）》