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痘苗病毒纯化实验

实验分类:

DNA 实验

最新修订时间:

简介

痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度离心的方法纯化。纯化的病毒可用于制备痘苗病毒 DNA ,用于不允许存在感染细胞蛋白污染的研究中,同时也可以用作高滴度的病毒储液。对于大规模的纯化(至少 1 L 的培养物),最好的方法是用 HeLa 细胞悬液作为感染的对象,而不要用单层培养的细胞。


内容来源于《精编分子生物学实验指南(第五版)》


来源:丁香实验

操作方法

大规模纯化

1. 使用前将等体积的疸苗病毒储液和 0.25 mg/ml 的胰酶混合,用力振荡。37℃ 水浴温育 30 min,在温育过程中每隔 5~10 min 涡旋振荡一次。2. 用血球计数器对 HeLa S3 细胞计数(附录 3F)。3. 将 5 × 108 的 HeLa S3 细胞转移至离心管中,室温 1800 g 离心 10 min,弃上清。4. 然后按 2 × 107 细胞/ml 的浓度用旋转摇瓶完

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