痘苗病毒纯化实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度离心的方法纯化。纯化的病毒可用于制备痘苗病毒 DNA ，用于不允许存在感染细胞蛋白污染的研究中，同时也可以用作高滴度的病毒储液。对于大规模的纯化（至少 1 L 的培养物），最好的方法是用 HeLa 细胞悬液作为感染的对象，而不要用单层培养的细胞。

内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

大规模纯化

1. 使用前将等体积的疸苗病毒储液和 0.25 mg/ml 的胰酶混合，用力振荡。37℃ 水浴温育 30 min，在温育过程中每隔 5～10 min 涡旋振荡一次。2. 用血球计数器对 HeLa S3 细胞计数（附录 3F）。3. 将 5 × 108 的 HeLa S3 细胞转移至离心管中，室温 1800 g 离心 10 min，弃上清。4. 然后按 2 × 107 细胞/ml 的浓度用旋转摇瓶完