2024顺利毕业
收集病毒感染+转染的上清(转染后是有荧光的)去吸附细胞,再铺琼脂,就是死活不长 请问怎么办,病毒连续挑斑纯化到底怎么操作效率比较高
土井挞克树
考虑是病毒浓度太低,可以多接种一些,保证接种量,浓度提高后就会长了
于小鱼鱼1998
先多挑几个病毒斑进行扩增,然后纯化之后在进行下面的步骤可以提高效率
loveliufudan
在处理病毒感染和转染的上清液时,如果您在尝试去吸附细胞并铺设琼脂时遇到困难,以下是一些建议:
1. 确保细胞状态良好:确保您的细胞处于适当的状态,具有良好的健康状况和适当的细胞密度。细胞的健康状态对于成功铺设琼脂非常重要。
2. 优化琼脂浓度:尝试不同浓度的琼脂来找到适合您的实验的最佳浓度。过高或过低的琼脂浓度都可能导致困难。
3. 调整上清液处理时间:在将上清液添加到细胞上之前,可以尝试不同的处理时间和条件。有时,较短的处理时间可能更适合。
4. 使用适当的培养基:确保使用适当的培养基来支持细胞生长和适应。
关于病毒的连续挑斑纯化,以下是一些常见的操作步骤:
1. 取一小部分含有病毒的上清液,称为”母液”。
2. 将母液加入到细胞培养皿中,让病毒感染细胞。
3. 观察感染情况,当感染适当程度时,将细胞和上清液一起收集。
4. 将收集的细胞和上清液进行离心,分离细胞和上清液。
5. 取上清液作为”次代液”,将其加入到新的细胞培养皿中,进行下一轮感染。
6. 重复步骤3-5,多次进行连续感染和收集上清液的过程。
通过多次连续挑斑纯化,您可以逐渐纯化目标病毒并提高纯化效率。请注意,在每一轮连续感染后,应调整细胞密度和感染程度以控制感染的合适程度。此外,对于病毒纯化,合适的实验条件和技术操作非常重要,具体操作步骤可能因病毒类型和实验目的而有所不同。
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