病毒纯化

dxyc42u

2022-12-11

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建议去已发表论文中看看，比如这篇

土井挞克树

2022-12-09

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杆状病毒纯化步骤：

1. 制备病毒上清的系列稀释液，该病毒上清获得自在无血清完全培养液中转染 pAC360 β-gal DNA的细胞。在含150 ug/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物下病毒形成蚀斑。

2. 当蚀斑形成后，用灭菌巴斯德吸管挑取一个分离较好的蓝色蚀斑，并将琼脂糖块移入一支含有1 ml 无血清完全培养液的无菌试管中。在旋涡混合器上剧烈篱荡，并用无血清完全培养液制备10^-1、10^-2和10^-3的系列稀释液。

3. 用含150 ug/ml X-gal 的琼脂糖顶层覆盖物蚀斑测定病毒（有助于发现重组子），重复蚀斑试验，直到获得纯的重组病毒贮液。

4. 用无菌吸管挑取一个纯的重组蚀斑，将琼脂糖块移入一含2.5x10⁶ Sf9细胞和5 ml 完全培养液（含10%胎牛血清）的25 cm² 培养瓶中。于27℃温育4~5天直到大多数细胞被感染。

5. 确定病毒滴度（应在5x10⁷~1x10⁸ pfu/ml之间）。

6. 加入1 ml 该毒种贮液于一支1.5 ml 螺口冻存管中，于-80℃可长期保存，于4℃保存剩余的液体（标记为初代毒种液）。从初代毒种液中生产大批病毒贮液并滴定之。