四环素控制系统诱导基因表达实验

实验分类：

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

为了克服用别的方法在哺乳动物细胞中诱导基因表达所遇到的困难，四环素调控的基因表达系统被发展出来。这些困难包括多向性的、非特异的作用；或诱导试剂、处理方法对细胞的毒性；高的非诱导表达背景等。

本实验所描述的方法是用改造的含有转录激活因子的四环素调控系统，它能在培养的细胞和转基因小鼠（在某种程度上）中表达四环素和目的基因。

内容来源于《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

pTet-tTAK 稳定转染（第一轮）

实验前准备详见「其他」。1. 用完全 DMEM-10 培养基培养细胞。转染前一天，用完全 DMEM/tet 培养基接种适量的细胞于 10 cm 组织培养皿中，使在转染时细胞生长至 1/3 汇片。此后，细胞的培养都要含 0.5 μg/ml tet。每次转染需要一个培养皿。一个典型的实验应该包括 tTA 对照培养皿、tTA 和靶基因对照培养皿，以及非转染对照培养皿。2. 转染之前使质粒线性化，调节质

pTet-tTAK 稳定转染（第二轮）

实验前准备详见「其他」。1. 用选择培养基（500 μmol/L L-组氨醇）培养可诱导表达 tTA 的稳定细胞系。转染前 1 天，用选择培养基（500 μmol/L L-组氨醇）接种适量的细胞于 10 cm 组织培养皿中，使在转染时细胞生长至 1/3 汇片。2. 转染之前使质粒线性化，调节质粒浓度>0.5 mg/ml。3. 用 500 μl HeBS 在干净的 4 ml 聚苯乙烯管混合 1