基于 PCR 的差减 cDNA 克隆实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

差减克隆是分离和鉴定两个细胞群中差异表达的 mRNA 的有效技术。相比较的细胞类型是［＋］（或测试）细胞和［-］（或驱动）细胞，在测试细胞中表达而不在驱动细胞中表达的 mRNA 将被分离出来。必需的差减次数主要取决于 cDNA 的多样性。多样性是指每一个细胞类型中不同的cDNA 或 cDNA 片段的总数（Davidson， 1986）。

来源：《精编分子生物学实验指南（第五版）》

来源：丁香实验

操作方法

基本方案

实验所需「材料」、「试剂」、「耗材」具体见「其他」1. 对每一组 ds cDNA （A 和 B）配制 2 个限制性内切核酸酶消化反应（AluI 和 AluI＋Rsal）： 30 ng ds cDNA 3 ul 10×AluI 缓冲液 10 U AluI 或 10 U AluI＋10 U RsaI加水到 30.0 ul。37℃ 温育过夜，确保完全消化。最好使用产生平端的酶。如果不是产生平端的酶，需要