质粒构建技术

DNA 实验

最新修订时间：2023-06-10

简介

质粒作为低等生物体内的最小遗传单位，具有分子量小、复制速度快等诸多优点，质粒构建为生物工程提供工具载体。

原理

对目的基因和载体 DNA 进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

应用

克隆

来源：丁香实验

操作方法

T4 DNA Ligase 即 T4 DNA 连接酶，可以催化粘端或平端双链 DNA 或 RNA 的 5’-P 末端和 3’-OH 末端之间以磷酸二酯键结合，该催化反应需 ATP 作为辅助因子。

基于同源基因重组原理，适用于向几乎任何载体在任何位点进行定向克隆，无需考虑插入片段自身携带的酶切位点可高效克隆 50bp~10kb 片段，同时构建时间也大大缩短。

质粒的构建是分子生物学研究中常用的实验技术，质粒是能够自主复制的环状 DNA 分子，将特定的基因序列插入到工程质粒中，再把质粒转化到细菌、细胞或酵母中，使质粒在其中表达。

在探索基因功能的实验中，我们需要过表达目的基因以判断其发挥的功能，因此我们需要将目的基因构建到表达载体上，再将载体通过侵染或瞬时表达的方式转入植物。双酶切实验可以将载体由环状变为线状，线状载体和带有同源臂的目的基因进行同源重组即可完成载体构建。