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蛋白质纯化
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实验方法
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问
蛋白镍柱纯化后透析怎么选择透析液
此用户已注销
透析液的选择应该根据蛋白质的性质和实验要求而定，一般来说，可以选择与蛋白质缓冲液成分相同或相似的透析液。透析时间一般在2-4小时之间。更换透析液的时间也应该根据实验要求而定，一般建议在6-8小时和10-14小时（第二天早晨）更换透析液。
5 回答
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问
蛋白纯化问题，换了不同载体，不同感受态，都表达不出目的蛋白
Eason老歌迷
感觉还是你的质粒没有构建好，你可以查查文献，看大家表达这个目的蛋白都用什么载体。
4 回答
556 围观
问
蛋白纯化中始终去不了的杂带怎么解决？
huarenqiang5
1、在平衡缓冲液里加一些盐,0.2-0.5MNaCl，这样可降低一些因离子作用带来的非特异吸附。2、同时在平衡液里加0.5%吐温等表面活性剂。3、可以用阶段洗脱的方法,例如用5mM和10mM还原谷胱甘肽去分别去洗脱。4、注意的问题是超声破碎时注意功率和时间，避免过强时间过长，降解蛋白。5、如果是降解造成的，可以加点酶的抑制剂。
3 回答
606 围观
问
蛋白纯化，只有一部分目的蛋白挂上柱子，western blot验证有his标签，
huarenqiang5
可能是缓冲液或样品未进行过滤、蛋白沉淀或杂质残留、清洗不及时等引起层析柱滤膜堵塞 ；流速过快、流动相粘度 (如乙醇等 )过高、温度过低。
4 回答
341 围观
问
带MBP标签的蛋白纯化
loveliufudan
MBP标签通常被用于帮助纯化目的蛋白，但是有时MBP标签本身会从目的蛋白中脱离。这可能是由于以下原因之一：蛋白结构域：MBP标签可能位于目的蛋白的结构域中，这可能导致MBP标签在纯化过程中被蛋白酶剪切或脱离。蛋白不稳定：目的蛋白可能不稳定，并且在纯化过程中会失去MBP标签。未正确装配：MBP标签可能未正确装配到目的蛋白中，导致MBP标签在纯化过程中被去除。纯化条件不当：使用的纯化条件可能不适合MB
2 回答
1202 围观
问
标签蛋白易洗脱，怎么查找原因？
天一湖医者
填料有问题，换填料。PH、离子强度是否合适，平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。
3 回答
434 围观
问
弥散性糖基化蛋白纯化后大小变了
illusio
有可能是蛋白降解了，蛋白降解了会出现多带现象，或者蛋白有其他修饰形式比如甲基化、磷酸化
3 回答
366 围观
问
纯化蛋白过镍柱时聚沉？
土井挞克树
蛋白浓度过高的时候，会发生聚集而沉淀。有些不易溶蛋白随着镍柱的富集作用就会沉淀。
1 回答
489 围观
问
求助，为啥这His标签蛋白纯化杂带这么顽强呢！
huarenqiang5
主要考虑以下几点：1、洗脱条件太温和。2、蛋白在柱子中沉淀。3、非特异性的疏水或者其他作用。4、蛋白和柱子接触时间过长。
3 回答
808 围观
问
在蛋白质纯化时，用PH2.0的酸性buffer洗脱，为什么不担心蛋白会遇酸沉淀？
豪杰6MBA
ph=pl ，打到蛋白质等电点蛋白会产生沉淀 ，ph2.0应该是过了蛋白的等电点,所以不会产生沉淀。
4 回答
647 围观
问
用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白有必要用Ni柱进行纯化吗？不纯化直接用来免疫可以吗？
天一湖医者
用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白是有必要用Ni柱进行纯化的。建议纯化后再用于ELISA.否则可能会产生很多非特异性的信号和比较高的背景.
2 回答
369 围观
问
原核纯化蛋白，IP纯化后的目的带比破碎后的上清的带弱，是什么原因
天一湖医者
是否考虑上样量过小 ，可增加上样量、降低一抗稀释度并延长曝光时间
2 回答
311 围观
问
我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。什么原因怎么解决
lyang556
估计是你的蛋白失活了，应该注意下实验步骤，看看提取、纯化、酶切具体是哪一步操作不当导致的，搞清楚后重做试试！
3 回答
587 围观
问
用于纯化的亲和层析填料形式有哪些？他们各自的优缺点是什么？
dxy_gwrp7ndq
分类及其优缺点：生物亲和层析生物亲和层析是利用自然界中存在的生物特异性相互作用物质对的亲和层析。通常具有高的选择性。典型的物质对有酶﹣底物、酶﹣抑制剂、激素﹣受体等。免疫亲和层析利用抗原抗体中的一方为配体，亲和吸附另一方的分离系统，称免疫亲和层析。免疫亲和层析应用相当广泛。此种方法的纯化蛋白倍数活性回收率非常高。用免疫层析柱进行各种类型的免疫检测被称为免疫检测法，特别适用于检测含量低微的样品。免疫
3 回答
1424 围观
问
疏水及方向层析和凝胶排阻层析提纯蛋白方法的各自适用于什么情形？
天一湖医者
巯水及方向层析：疏水层析也称疏水作用下层析(从分离纯化生命物质的机制来看，也属于吸附层析一类。疏水层析和反相层析分离生命物质的依据是一致的，利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离。该方法基于的是蛋白质的疏水差异，在高盐溶液中，蛋白质会与疏水配基相结合，而其他的杂蛋白则没有此种性质，利用此种性质，可以将蛋白质初步的分离，用于盐析之后的蛋白质进一步提纯。凝胶排
2 回答
520 围观
问
DTT特性在蛋白纯化和保存中有什么作用？
bamboopiggy
Cys存在于多种蛋白中，且其中的-SH常作为活性中心发挥作用，或者，两个-SH连接成二硫键，是维持蛋白质高级构象重要桥梁。-SH具有很强的还原性，溶液被溶液中的溶解氧或其它氧化物氧化，从使蛋白失去活性。所以，在蛋白纯化 和保存时，在溶液中加入一定量的DTT，以免蛋白-SH被氧化而失活
3 回答
1908 围观
问
常用的蛋白纯化技术有什么？怎么在大肠杆菌、细胞中进行表达？
我是金博士
根据你想要表达的蛋白，查找基因，构建到原核载体上，在大肠杆菌中表达，然后进行纯化。
1 回答
1858 围观
问
原核蛋白纯化，上清跑胶有带，纯化后没带是什么原因
yangyang214
检测结合后的上清，以及beads，看是没结合上还是没洗脱下来。
5 回答
680 围观
问
蛋白纯化常用的标签有哪些？
dxy_gwrp7ndq
常用的标签有His标签、GST标签、Strep II标签、MBP标签、Flag标签、 Myc标签、SUMO标签、组合式的双标签
6 回答
1863 围观
问
蛋白纯化出现沉淀怎么回事？怎么解决呢？
天一湖医者
首先需要确定沉淀的诱因：pH值处于等电点附近、高盐下析出还是样品结构的稳定性，当然还有可能是HCP在作祟？第一种和第二种就比较简单，调整pH值或者盐浓度；第三种情况的话就需要做一些缓冲液的筛选以及添加剂的筛选；HCP的话就考虑增加去除HCP的淋洗工艺
3 回答
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