lyang556
估计是你的蛋白失活了,应该注意下实验步骤,看看提取、纯化、酶切具体是哪一步操作不当导致的,搞清楚后重做试试!
bamboopiggy
首先确定你的融合蛋白是有活性的,然后每一步实验后,都取样检测活性。基本就可以确定是哪一步导致的失活了。
dxywode
既然是疏水性很强你可以加点甘油或者乙二醇降低极性,这样溶解就会好得多,此外你也直接加2%的PEG这样也降低极性,同时保护你的蛋白,你再做纯化就可以了,我以前遇到这样的蛋白是用10%的乙醇加3-5%的PEG-5000,这样的情况下蛋白还是活性回收率很高,我觉得那些表面活性剂能不用还是不用的好,你失去活性你可以监测一下提取,纯化,酶切到底哪里失去了活性,这样更容易解决你的问题。还有注意缓冲液PH值,看看改变它对溶解度有没有影响。蛋白有沉淀那你可以稍微把蛋白的浓度降低点,这也是个办法。