蛋白纯化中始终去不了的杂带怎么解决？

1、在平衡缓冲液里加一些盐,0.2-0.5MNaCl，这样可降低一些因离子作用带来的非特异吸附。

2、同时在平衡液里加0.5%吐温等表面活性剂。3、可以用阶段洗脱的方法,例如用5mM和10mM还原谷胱甘肽去分别去洗脱。

4、注意的问题是超声破碎时注意功率和时间，避免过强时间过长，降解蛋白。

5、如果是降解造成的，可以加点酶的抑制剂。

几点建议:

1. 检查表达构建体是否正确,是否存在额外的非自愿蛋白与GST融合,影响GST纯化效果。可以测序验证构建体序列。

2. 优化培养条件和诱导条件,获得高质量和高量的蛋白表达。高表达量有利于后续纯化。

3. 采用多重纯化策略,除GST纯化外,可以尝试Ni-NTA树脂纯化、离子交换层析等,组合使用可以获得更高纯度。

4. 如果标签切除后,蛋白难以吸附到GST树脂,说明蛋白本身含量太低,或存在溶解性等问题。可以优化切除条件,或在切除前进行浓缩。也可以尝试其他树脂,如琼脂糖树脂。

5. 最后,也可以尝试其他表达系统,如昆虫细胞表达或哺乳动物细胞表达。不同系统表达的蛋白质可能会有可纯化性的差异。

6. 如果上述策略仍无效,则可以考虑重组表达该蛋白的高度同源蛋白,寻找更易纯化的同源蛋白进行结构与功能研究。

选择合适的纯化方法：在纯化过程中，可以根据目标蛋白的特性和杂质的种类，选择合适的分离和纯化方法，例如离子交换、凝胶过滤、亲和层析等，以减少杂带的产生。

　　使用高纯度的试剂和设备：使用高纯度的试剂和设备，例如离心管、滤器、柱子、管路等，可以减少对目标蛋白的污染，从而降低杂带的产生。

　　进行后处理：在纯化过程中，可以通过进行后处理，例如再结晶、再沉淀、电泳等，以消除杂带。