原理
结核杆菌和麻风杆菌通常称为抗酸杆菌,由于菌体内含有脂质蛋白质和多糖类物质,并由糖脂形成一个蜡质的外壳,当染色剂结合形成复合物后,用含酸分化剂处理也不易脱色,具有抵抗酸的作用,所以被称为抗酸杆菌。常用 Ziehl-Neelsen 抗酸杆菌染色法。
材料与仪器
二甲苯 无水乙醇 中性树胶 蒸馏水 碱性复红 石炭 盐酸酸
滴管
步骤
石炭酸-复红液:碱性复红 1 g,纯乙醇 10 ml,石炭酸(5%)水溶液 100 ml,碱性复红溶于乙醇内,然后与石炭酸水溶液混合,用前过滤。
1. 石蜡组织切片,常规脱蜡至水。
2. 浸入石炭酸-复红液 1 h,于 37℃ 或 56℃ 温箱内 30 min。
3. 自来水洗,蒸馏水 1 min。
4. 用 0.5% 盐酸乙醇液分化,浸入自来水洗 1 min。
5. 蒸馏水洗,0.1% 亚甲蓝水溶液处理 1 min。
6. 蒸馏水 1 min,95% 乙醇快速分化。
7. 无水乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
注意事项
1. 石炭酸-复红液染色后,注意盐酸乙醇分化适中,必要时在显微镜下观察。
2. 亚甲蓝(美蓝)染色应浅些,便于对比清楚。
常见问题
结果:抗酸杆菌呈红色,细胞核呈蓝色。
来源:丁香实验